[发明专利]一种利用脂质区分日本类脐菇和糙皮侧耳的方法

权利要求书

1.一种筛选用于区分日本类脐菇和糙皮侧耳的脂质的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤(1)、分别将日本类脐菇和糙皮侧耳干燥后粉碎，得到蘑菇粉末，以甲基叔丁基醚:甲醇体积比为2:1的混合溶剂为提取溶剂，对蘑菇粉末进行超声提取，滤液经浓缩，得到蘑菇总脂；

步骤(2)、蘑菇总脂定量溶解，过滤，离心，取上清液，通过超高效液相色谱串联高分辨质谱分析鉴定脂质分子结构，并通过不同脂质标准品构建标准曲线，通过外标法对蘑菇中的脂质进行定量；

步骤(3)、采用正交偏最小二乘法对脂质数据进行分析，筛选出变量权重重要性VIP比较大的脂质，再通过T检验计算P值，筛选出VIP2且P0.05的脂质作为区分日本类脐菇和糙皮侧耳的标志物。

2.根据权利要求1所述的筛选用于区分日本类脐菇和糙皮侧耳的脂质的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述的蘑菇粉末与提取溶剂的质量体积比为2g:60mL；超声提取的次数为3次，每次超声提取的功率为200W，每次超声提取的时间为30min。

3.根据权利要求1所述的筛选用于区分日本类脐菇和糙皮侧耳的脂质的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的蘑菇总脂定量溶解为：将蘑菇总脂和色谱级甲醇按照质量体积比5～15mg/mL混合，超声处理使脂质完全溶解。

4.根据权利要求3所述的筛选用于区分日本类脐菇和糙皮侧耳的脂质的方法，其特征在于：步骤(2)中，将蘑菇总脂和色谱级甲醇按照质量体积比15mg/mL混合，超声处理使脂质完全溶解。

5.根据权利要求1所述的筛选用于区分日本类脐菇和糙皮侧耳的脂质的方法，其特征在于：步骤(2)中，超高效液相色谱的条件：Phenomenex Kinetex C18色谱柱(2.6μm,100×2.1mm)，流速：0.17mL/min，柱温：40℃，进样量：2μL；流动相A：由水:甲醇:乙腈体积比为1:1:1的混合溶剂配制成浓度为5mmol/L的乙酸铵溶液，流动相B：由异丙醇:乙腈体积比＝5:1配制成浓度为5mmol/L的乙酸铵溶液；梯度洗脱条件如下：

6.根据权利要求1所述的筛选用于区分日本类脐菇和糙皮侧耳的脂质的方法，其特征在于：步骤(2)中，高分辨质谱的条件为：质谱型号：Thermo Q Exactive，喷雾电压：3.81kV，鞘气流速：40，鞘气为N₂，毛细管温度：325℃，辅助气体为N₂，辅助气体加热温度：350℃，辅助气体流速：20，碰撞能：25/30/35eV，一级质谱扫描范围：120-1800Da，二级质谱扫描范围：120-1800Da，扫描模式：正离子模式和负离子模式分开扫描。

7.根据权利要求1所述的筛选用于区分日本类脐菇和糙皮侧耳的脂质的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述的脂质标准品为PC(17:0/17:0)，PE(17:0/17:0)，PG(17:0/17:0)，PA(17:0/17:0)，PI(8:0/8:0)，TAG(18:2/18:2/18:2)，DGTS(16:0/16:0)，PS(17:0/17:0)，Cer(d18:2/12:0)；

所述的标准曲线的构建方法为：精确称量脂质标准品，采用色谱级甲醇:二氯甲烷(90:10，v/v)稀释成系列梯度，进行超高效液相色谱串联高分辨质谱分析，以脂质的浓度(mg/mL)作为横坐标，峰面积作为纵坐标，绘制标准曲线。

8.根据权利要求1所述的筛选用于区分日本类脐菇和糙皮侧耳的脂质的方法，其特征在于：步骤(3)中，区分日本类脐菇和糙皮侧耳的标志物为：