[发明专利]扩增TCR α链和/或β链的引物组合及其应用

说明书

本发申请涉及扩增TCRα链和/或β链的引物组合及其应用。本发明提供了通用的扩增TCRα链和/或β链的引物组合，细胞可直接裂解进行逆转录，逆转录产物经cDNA扩增进行模板富集，之后进行TCR序列扩增。该方法优化了TCR扩增的实验条件、简化了实验过程，可有效提高扩增效率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种扩增TCR α链和/或β链的引物组合及其应用。

背景技术

T淋巴细胞在免疫系统中起到重要作用，而T细胞受体(T cell receptor，TCR)为所有T细胞表面的特征性标志，负责特异性识别与MHC(主要组织相容性复合体)结合的抗原肽的蛋白。当TCR与抗原肽和MHC的复合物结合时，T淋巴细胞通过信号转导被激活，进入后续的免疫应答过程。TCR是由两条不同肽链构成的异二聚体，由两条肽链α和β或γ和δ组成。由于细胞发育过程中TCR存在复杂的V(D)J重排机制，导致TCR基因序列多样性极为丰富，因此TCR具有非常高的多样性，是人类基因组中多态性最高的区域之一，决定着人的免疫系统如何适应环境的变化。

将经功能活性验证后的T细胞进行多聚体(multimers)分选和/或T细胞活化表面分子(例如4-1BB)分选是常用的获得抗原特异性TCR的方法。T细胞经单细胞RNA-seq测序方法可获得特异性TCR序列，但此种方法过程较复杂、成本较高。

因此，开发一种高效扩增、操作简单且成本低的TCRα链和/或β链序列扩增方案进而构建TCR免疫组库是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

基于此，本发明有必要提供一种扩增TCR α链和/或β链的引物组合、试剂盒，该引物组合或试剂盒能够提高TCR的扩增效率，可以将其用于构建TCR免疫组库。

此外，本发明还提供一种扩增TCR α链和/或β链的方法。

具体技术方案如下：

一种引物组合，所述引物组合包括逆转录引物组，所述逆转录引物组包括逆转录正向引物和逆转录反向引物；其中，所述逆转录正向引物包括5’-第一Read1序列-TTTCTTATTrGrG+G-3’，所述逆转录反向引物包括SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

在其中一个实施例中，所述引物组合还包括cDNA扩增引物组，所述cDNA扩增引物组包括cDNA扩增正向引物和cDNA扩增反向引物；其中，所述cDNA扩增正向引物包括第二Read1序列，所述cDNA扩增反向引物包括SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。其中，所述第二Read1序列与第一Read1序列相同或不同。

在其中一个实施例中，所述引物组合还包括巢式PCR引物组，所述巢式PCR引物组包括第一轮巢式PCR引物组。

在其中一个实施例中，所述第一轮巢式PCR引物组的正向引物包括第三Read1序列或包括5’-第一测序接头1-第四Read1序列-3’；所述第一轮巢式PCR引物组的反向引物包括第一轮α链的反向引物和/或第一轮β链的反向引物，可选地，所述第一轮α链的反向引物包括SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列，所述第一轮β链的反向引物包括SEQ IDNO.7所示的核苷酸序列。其中，所述第三Read1序列与第二Read1序列相同或不同；和/或，第四Read1序列与第三Read1序列相同或不同。

可选地，所述第一轮巢式PCR引物组的正向引物还包括载体片段序列。