[发明专利]GalNAc簇亚磷酰胺和靶向治疗性核苷

说明书

本发明提供了包含一种或多种治疗性寡核苷酸例(如siRNA)和一种或多种靶向缀合化合物的寡核苷酸试剂。在一些实施方案中，所述缀合化合物包含一种或多种作为靶向基团的N‑乙酰半乳糖胺、支化基团(branching group)和连接基团。通过将长碳链并入GalNAc簇中(而不是使用多个酰胺基团)来延长链长，通过减少步骤数量的方式实现简化合成。

本发明申请是基于申请日为2022年3月8日、申请号为202210230071.5、发明名称为“GalNAc簇亚磷酰胺和靶向治疗性核苷”的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及使用碳水化合物缀合物递送治疗剂领域。特别地，本发明提供了新的碳水化合物缀合物和包含这些缀合物的iRNA试剂，它们有利于这些iRNA试剂的体内递送，以及适用于体内治疗用途的iRNA组合物。此外，本发明提供制备这些组合物的方法，以及使用这些组合物将这些iRNA试剂引入细胞的方法，例如用于治疗包括代谢性疾病或病患(如肝脏疾病或病患)在内的各种疾病症状。

背景技术

治疗剂的肝细胞靶向递送是治疗代谢、心血管和其他肝脏疾病的特别有吸引力的策略。去唾液酸糖蛋白受体(ASGP-R)在肝细胞上大量表达，而在肝外细胞上很少发现，这使其成为肝细胞靶向治疗的理想入口。已经阐明ASGPR的碳水化合物结合域，这使得有效结合剂的设计更加简单(Bioconjugate Chem.2017,28,283-295)。已经开发多种用于靶向ASGP-R的多价配体，这其中明确定义的多价N-乙酰D半乳糖胺(GalNAc)部分显示出高结合亲和力(J Am Chem Soc.2017,139,3528–3536)。最近，数个基于针对ASGP-R的GalNAc配体的基因传递系统显示出令人鼓舞的临床结果，并且FDA已批准与GalNAc偶联的siRNA用于肝病(Molecular Therapy,2020,28,1759-1771)。

反义寡核苷酸(ASO)和siRNA与互补的mRNA结合，并招募因子来降解靶mRNA以调节蛋白质表达，从而产生药理学反应(Nucleic Acids Research,2018,46,1584–1600)。第二代ASO通常是20个核苷酸长的硫代磷酸酯寡核苷酸，其包含一个10个核苷酸的DNA“缺口”并且末端用2'-O-甲基、2'-O-甲氧基乙基(MOE)或锁核酸(LNA)核苷酸修饰(Drug DiscoveryToday,2018,23,101-114)。有几种针对各种适应症的第二代ASO已进入临床，其中许多靶向主要在肝脏的肝细胞中表达的mRNA。最近，已经证明ASOs和siRNAs与三接头(tri-antennary)GalNAc配体的缀合可以提高肝细胞的效力(Molecular Therapy,2019,27,1547-1555)。已经评估了寡核苷酸3'-和5'-末端处的GalNAc缀合，并且它们在细胞和动物中均显著增强了效力(Bioconjugate Chem.2015,26,1451–1455)。

相关现有技术

WO2009/002944A1描述了一种与至少一种(优选双接头或三接头)碳水化合物配体缀合的iRNA试剂。所述碳水化合物缀合的iRNA试剂特别针对肝脏的实质细胞。

WO2015/042447A1描述了一系列支化基团，该支化基团上缀合有治疗性核苷剂和GalNAc配体。

WO2017084987A1描述了GalNAc亚磷酰胺衍生物，其可以在固相寡核苷酸合成中与核苷构件物一起作为构件物直接引入。

然而，合成合适的多价GalNAc配体并非易事，并且通常需要10多个化学反应步骤。在这里，我们通过引入长碳链创造新的结构来改进GalNAc配体，以实现更有效的合成；并且GalNAc偶联物具有更长的耐久性。

附图说明

图1A：GalNAc和寡核苷酸之间存没有间隔物(spacer)的GalNAc簇B001与GalNAc和寡核苷酸之间存在间隔物(spacer)阳性对照GalNAc簇B005，处理小鼠后的血浆ApoB水平。