[发明专利]一种基于RPA检测烟粉虱体内共生菌Rickettsia的检测方法在审
| 申请号： | 202310018439.6 | 申请日： | 2023-01-06 |
| 公开（公告）号： | CN116219042A | 公开（公告）日： | 2023-06-06 |
| 发明（设计）人： | 李玉婷;李兴烨;栾军波;郑康吾 | 申请（专利权）人： | 沈阳农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 周新楣 |
| 地址： | 110866 辽宁省沈*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 rpa 检测 烟粉虱 体内 共生 rickettsia 方法 | ||
1.一种基于RPA检测烟粉虱体内共生菌Rickettsia的检测引物组，其特征在于，所述引物组包括引物Ric-RPAF和引物Ric-RPAR，所述引物Ric-RPAF的序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物Ric-RPAR的序列如SEQ IDNO.3所示。
2.一种基于RPA检测烟粉虱体内共生菌Rickettsia的检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的检测引物组。
3.一种基于RPA检测烟粉虱体内共生菌Rickettsia的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)提取所述烟粉虱基因组DNA；
(2)以步骤(1)得到的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述的引物组进行RPA扩增，得到RPA扩增产物；
(3)检测步骤(2)得到的RPA扩增产物中是否存在如SEQ ID No.1所述的序列，若存在，表明被测样品被共生菌Rickettsia感染；若不存在，表明被检测样品为未被共生菌Rickettsia感染。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述RPA扩增的扩增体系以50μl计，包括以下组分：RehydrationBuffer29.5μl，去离子水13.0μl，引物Ric-RPAF、引物Ric-RPAR各2μl，模板DNA1μl，醋酸镁溶液2.5μl。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述引物Ric-RPAF、引物Ric-RPAR的浓度为0.1-0.6μmol/L，所述模板DNA的浓度为120-180ng/μl。
6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)所述RPA扩增的温度为35-42℃，所述RPA扩增的时间为10-40min。
7.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，采用1-2％琼脂糖凝胶电泳的方法检测步骤(2)得到的RPA扩增产物。
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