[发明专利]胶体金免疫层析试纸的制备方法、胶体金免疫层析试纸及试纸盒

权利要求书

1.一种胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将流感病毒A抗体与粒径为50nm-70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用；

在层析膜上设置检测线和质控线，将用以识别流感病毒A抗原的第一抗体固定在所述检测线，将用以识别所述流感病毒A抗体的第二抗体固定在所述质控线，备用；

将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测流感病毒A抗原的胶体金免疫层析试纸。

2.如权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm-70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：

准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm-70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH，然后加入浓度为10ug/mL-30ug/mL流感病毒A抗体，反应预设时间，再加入封闭剂，封闭预设时间，得到反应后的溶液并浓缩，得到免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，烘干，备用。

3.如权利要求1或2所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm-70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤中，包括以下步骤：

准备质量体积浓度为万分之四、粒径为50nm-70nm的胶体金颗粒构成的胶体金溶液，并调节所述胶体金溶液的pH7.0-9.0，然后加入浓度为10ug/mL-30ug/mL的流感病毒A抗体，在室温下振荡反应4h-5h，再加入质量体积浓度为0.5％-1.0％BSA溶液将未被抗体包被的裸露的金表面位点覆盖，封闭30min-60min，在离心转速为6000r/min-8000r/min条件下离心10min-15min，去除上清液，得到浓缩10倍的免疫标签，采用复溶液将所述免疫标签重悬，得到稀释5-10倍的免疫标签复溶液，将所述免疫标签复溶液涂覆于结合垫，于4542℃烘干16h-18h，备用。

4.如权利要求1至3中任一项所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将流感病毒A抗体与粒径为50nm-70nm的胶体金颗粒结合形成免疫标签，将所述免疫标签固定于结合垫，备用的步骤之前，还包括以下步骤：

配置结合垫预处理液，将结合垫置于所述结合垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述结合垫取出干燥，备用，其中，所述结合垫预处理液的成分包括10mM-20mM Tris-HCI，100mM-150mM NaCI，质量体积浓度为1％-1.5％酪蛋白，质量体积浓度为3％-5％蔗糖，体积浓度为0.1％-5％Tween-20，质量体积浓度为0.1％-0.2％PEG 20000，体积浓度为0.1％-0.2％proclin 300。

5.如权利要求1至4中任一项所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，在将样本垫、固定有所述免疫标签的结合垫、固定有所述第一抗体和所述第二抗体的层析膜以及吸水垫依次设置在底板上，形成检测流感病毒A抗原的胶体金免疫层析试纸的步骤之前，还包括以下步骤：

配置样本垫预处理液，将样本垫置于所述样本垫预处理液中浸泡，浸泡预设时间后，将所述样本垫取出干燥，备用，其中，所述样本垫预处理液的成分包括10mM-20mM PBS，体积浓度为1％-1.5％Tween-20，质量体积浓度为0.2％-0.5％S9，质量体积浓度为4％-6％蔗糖，质量体积浓度为0.5％-0.8％PEG6000，质量体积浓度为1.5％-2％BSA，体积浓度为0.1％-0.2％proclin 300。

6.如权利要求1至5中任一项所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述胶体金溶液的pH为7.5。

7.如权利要求1至6中任一项所述的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于，所述流感病毒A抗体包括M1302流感病毒抗体。