[发明专利]一种口腔鳞癌颈部淋巴结转移灶类器官的培养基及构建方法在审
| 申请号： | 202211736456.5 | 申请日： | 2022-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN115786264A | 公开（公告）日： | 2023-03-14 |
| 发明（设计）人： | 邵思源;周榕;钟来平;何爱娜 | 申请（专利权）人： | 上海万何圆生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 上海互顺专利代理事务所(普通合伙) 31332 | 代理人： | 韦志刚;曹月明 |
| 地址： | 200000 上海市浦东新区中国(*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 口腔 颈部 淋巴结 转移 器官 培养基 构建 方法 | ||
1.一种口腔鳞癌颈部淋巴结转移灶类器官的培养基，其特征在于，所述培养基在Advanced DMEM/F12基础培养基下加入以下重量百分比的物质：1-2％的Hepes缓冲液、1-2％的青霉素链霉素溶液、1-2％的Glutamax、2-3％的B27、1-2％的N2、5-10mmol/L的烟酰胺、10-20ng/mL的NRG1、1-2mmol/L的N-乙酰半胱氨酸、10-20uM的Y-27632、100-120ng/ml的Noggin、100-120ng/ml的R-spondin1、500-550nmol/L的A83-01、100-120ng/ml的EGF、50-60ng/ml的FGF10、100-120ng/ml的FGF2、10-15uM的Forskolin。
2.一种口腔鳞癌颈部淋巴结转移灶类器官的构建方法，所述构建方法包括以下步骤：
在消化液中，将肿瘤组织消化，得到消化组织悬液，
将所述消化组织悬液进行细胞过滤离心，保留沉淀，得到细胞沉淀；
利用缓冲液重悬所述细胞沉淀，统计活细胞数；
根据统计的活细胞数，将类器官接种至孔板中,加入培养基，将孔板静置于培养箱中进行培养；
培养3天后，类器官培养体系中肿瘤浸润淋巴细胞只剩余5％活性细胞，将类器官消化后，终止消化，离心；
利用缓冲液重悬所述细胞沉淀，统计活细胞数；
根据统计的活细胞数，将类器官接种至孔板中,加入培养基，将孔板静置于培养箱中进行培养；
所述培养基在Advanced DMEM/F12基础培养基下加入以下重量百分比的物质：
1-2％的Hepes缓冲液、1-2％的青霉素链霉素溶液、1-2％的Glutamax、2-3％的B27、1-2％的N2、5-10mmol/L的烟酰胺、10-20ng/mL的NRG1、1-2mmol/L的N-乙酰半胱氨酸、10-20uM的Y-27632、100-120ng/ml的Noggin、100-120ng/ml的R-spondin1、500-550nmol/L的A83-01、100-120ng/ml的EGF、50-60ng/ml的FGF10、100-120ng/ml的FGF2、10-15uM的Forskolin。
3.根据权利要求2所述的一种口腔鳞癌颈部淋巴结转移灶类器官的构建方法，其特征在于，所述消化液由5g/ml的胶原酶I和10ug/ml的DNA酶I组成，所述消化液以无血清DMEM培养基为溶剂。
4.根据权利要求2所述的一种口腔鳞癌颈部淋巴结转移灶类器官的构建方法，其特征在于，所述缓冲液为无菌PBS缓冲液。
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