[发明专利]一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测方法及检测用引物和探针在审
| 申请号： | 202211732754.7 | 申请日： | 2022-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN116042924A | 公开（公告）日： | 2023-05-02 |
| 发明（设计）人： | 王孟强;徐雅进;胡景杰;包振民;王燕;刘可欣;邵烁如 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学三亚海洋研究院;中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 王美燕 |
| 地址： | 572024 海南省三亚*** | 国省代码： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 era 技术 虾偷死野田村 病毒 快速 可视化 检测 方法 引物 探针 | ||
1.一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测用引物和探针，其特征在于，所述引物包括如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的上游引物，如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的下游引物，所述探针依序包括如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的探针，所述探针SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的3’端标记荧光报告基团，探针SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的5’端标记荧光猝灭基团，所述荧光报告基团和荧光猝灭基团通过四氢呋喃连接。
2.根据权利要求1的一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测用引物和探针，其特征在于，所述四氢呋喃的连接位点为自探针SEQ IDNO.3所示核苷酸序列的5’端至少30nt，自探针SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的3’端至少15nt。
3.根据权利要求1或2的一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测用引物和探针，其特征在于，所述探针SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的自5’端起第26位碱基T标记FAM荧光报告基团，探针SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的自5’端起第1位碱基T标记BHQ1荧光猝灭基团。
4.根据权利要求3的一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测用引物和探针，其特征在于，所述四氢呋喃插入FAM荧光报告基团和BHQ1荧光猝灭基团之间。
5.根据权利要求1的一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测用引物和探针，其特征在于，所述探针还包括在SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的3’端引入C3-space阻断基团。
6.一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)提取待测样品的DNA；
2)使用如权利要求1～5任意一项所述的引物和探针进行ERA反应，得ERA扩增产物；
3)检测ERA扩增产物的荧光信号强度，判断待测样品是否为虾偷死野田村病毒。
7.根据权利要求6的一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测方法，其特征在于，所述ERA反应体系包括如权利要求1～5任意一项所述的引物和探针，溶解剂，ddH2O，乙酸镁；所述ERA反应的温度为35℃-45℃，反应时间为20min。
8.根据权利要求6的一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测方法，其特征在于，步骤3)中，所述ERA扩增产物在20min内扩增曲线的荧光值出现拐点，或ERA扩增产物于456nm蓝光下透过EB滤镜观察到荧光，判断待测样品感染虾偷死野田村病毒。
9.一种如权利要求1～8任意一项所述的一种基于ERA技术的虾偷死野田村病毒快速可视化检测方法及检测用引物和探针在检测虾偷死野田村病毒中的应用。
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