[发明专利]针对O型口蹄疫病毒的免疫血清抗体的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种针对O型口蹄疫病毒的免疫血清抗体的单克隆抗体及其应用，涉及动物病毒学与动物传染病学检测技术领域。本发明使用vp1蛋白做为免疫原，分别使用含B细胞抗原表位的多肽与灭活抗原做为筛选原，筛选出能与O型口蹄疫病毒灭活疫苗和合成肽疫苗免疫背景血清均有竞争作用的单克隆抗体，并建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA试剂盒，大幅缩短了检测时间，提高了试剂盒敏感性、特异性以及稳定性。

技术领域

本发明涉及动物病毒学与动物传染病学检测技术领域，特别涉及针对O型口蹄疫病毒的免疫血清抗体的单克隆抗体。

背景技术

口蹄疫(Foot And Mouth Disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot And MouthDisease Virus，FMDV)感染引起的偶蹄动物(猪、牛、羊、骆驼等)共患的急性、热性、接触性传染病，该病被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病之首，对畜牧业生产的危害极大，消灭和控制口蹄疫是各国政府共同关注的世界性问题。我国对口蹄疫的控制和扑灭，主要措施是强制免疫。目前，广泛使用的口蹄疫疫苗以灭活苗和合成肽疫苗使用得最多。口蹄疫疫苗免疫主要诱导中和抗体的产生，安全有效的疫苗是成功预防、控制乃至最终消灭口蹄疫的先决条件。

血清学检测是对血清中的特异性抗体进行定性或定量鉴定，在口蹄疫诊断检疫及动物群体口蹄疫疫苗效力评价中应用最为广泛。病毒中和试验是最为经典的口蹄疫血清学诊断方法，但是该试验存在动用活毒，操作时间长，试验结果难重复的缺点。从1986年发展起来的液相阻断ELISA(LPB)由于其快速、重复性好、不动用活毒，成为了病毒中和试验的替代方法，但其也存在假阳性率高，不能检测多肽疫苗免疫背景的血清抗体等缺点。固相竞争ELISA方法(SPC)除了具有液相阻断ELISA方法(LPB)的优点外，其特异性更好，操作更为简便，结果更稳定，容易重复，2004年被世界动物卫生组织(OIE)确立为国际贸易中口蹄疫血清学检测指定方法之一。

口蹄疫病毒易变异，现已确定有7个病毒血清型，O、A、C型(即欧洲型)，SAT1、SAT2、SAT3(南非1，2，3型，即非洲型)和AsiaⅠ(亚洲Ⅰ型)。这7个病毒血清型间无交叉反应，各血清型又包括不同的变异型。FMDV的抗原位点研究表明，结构蛋白VP1、VP2、VP3、VP4均参与抗原位点的构成。O型口蹄疫病毒的抗原位点主要位于结构蛋白VP1上，VP1是诱导动物产生中和抗体的主要成分，其中141～160、200～213位氨基酸肽段能够保护动物抵抗病毒攻击，是重要的B细胞抗原表位，也是O型口蹄疫病毒疫苗免疫和诊断方法建立重要的靶标。

现有技术中，例如CN114921418A提供了一株O型口蹄疫类病毒颗粒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D3及试剂盒和检测方法，该方法能检测出O型口蹄疫类病毒颗粒疫苗免疫血清抗体，用于区分O型口蹄疫野毒、全病毒灭活疫苗和类病毒颗粒疫苗免疫血清。又例如CN106405092A提供的一种基于型特异性单抗的O型口蹄疫病毒抗体固相竞争ELISA试剂盒，试剂盒中含有HRP标记的O型口蹄疫特异性单抗。又例如CN109799342A提供的一种O型口蹄疫病毒抗体竞争ELISA检测试剂盒，使用由O型口蹄疫病毒的结构蛋白VP0、VP1和VP3组装而成的O型口蹄疫病毒样颗粒免疫兔子，分离获得的竞争性抗体用HRP直接标记。然而，上述现有技术均采用的是常规的单克隆抗体筛选方法，没有提供目前市售各类口蹄疫O型疫苗免疫血清的检测效果，无法对现售疫苗的免疫效果进行评价。

发明内容

针对以上现有技术的不足，本发明提供了针对O型口蹄疫病毒的免疫血清抗体的单克隆抗体，还提供了相应的固相竞争ELISA试剂盒；使用vp1蛋白做为免疫原，分别使用含B细胞抗原表位的多肽与灭活抗原做为筛选原，筛选出能与O型口蹄疫病毒灭活疫苗和合成肽疫苗免疫背景血清均有竞争作用的单克隆抗体，建立O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA试剂盒，其检测位点是针对目前市售的灭活疫苗和合成肽疫苗都有竞争效果的，提高了试剂盒敏感性、特异性以及稳定性；能对口蹄疫O型疫苗的免疫效果进行准确评价，对养殖场O型口蹄疫防控具有生产指导意义，同时操作简单，大幅缩短了检测时间，节约了成本。具体通过以下技术实现。