[发明专利]针对O型口蹄疫病毒的免疫血清抗体的单克隆抗体及其应用

权利要求书

1.针对O型口蹄疫病毒的合成肽疫苗和灭活苗免疫血清抗体的单克隆抗体，其特征在于，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链的3个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示；所述轻链的3个互补决定区CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4-6所示。

2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

3.权利要求1所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、根据O型口蹄疫病毒的vp1蛋白的基因序列，构建vp1蛋白的重组表达质粒，通过表达、纯化获得vp1蛋白；

同时，将O型口蹄疫病毒的vp1蛋白的第141-160的肽段和200-213位的肽段进行串联，获得合成多肽；

S2、使用步骤S1所得的vp1蛋白进行动物免疫，制备免疫脾细胞的细胞悬液；

S3、将步骤S2制备的免疫脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，分别使用市售口蹄疫O型灭活抗原，以及步骤S1制备的vp1蛋白和合成多肽包被的板子，进行间接ELISA检测，获得若干待选杂交瘤细胞株；

S4、将步骤S3所得的若干待选杂交瘤细胞株，分别使用以市售的灭活疫苗免疫的血清和以市售的合成多肽疫苗免疫的血清做竞争ELISA筛选，获得阳性杂交瘤细胞株；

S5、使用步骤S4制备的阳性杂交瘤细胞株制备获得所述单克隆抗体。

4.根据权利要求3所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S1中，优化后的O型口蹄疫病毒的vp1蛋白的基因序列如SEQ ID NO.9所示。

5.根据权利要求3所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S3中，进行间接ELISA检测后，P/N≥2.1的细胞即为待选杂交瘤细胞株。

6.根据权利要求3所述的单克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S4中，两种血清的PI值均≥60％的杂交瘤细胞株即为所述阳性杂交瘤细胞株。

7.一种针对O型口蹄疫病毒的合成肽疫苗和灭活苗免疫血清抗体的固相竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括HRP标记的权利要求1所述的单克隆抗体。

8.根据权利要求6所述的固相竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，还包括酶标板、样品稀释液、样品洗涤液、显色液和终止液，所述酶标板上包被了O型口蹄疫病毒vp1蛋白的。