[发明专利]一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法

说明书

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体为一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法。本发明提供了一种蛋白G磁珠偶联方法，对羧基磁珠进行活化，然后使用链球菌蛋白G对其进行偶联得到蛋白G磁珠。将制备得到的蛋白G磁珠对轻链原料进行纯化，进一步制备尿液特殊蛋白质控品。本发明制备的尿液特殊蛋白质控品具有很好的浓度区间分布，极好的稳定性，储存时间长。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体为一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法。

背景技术

轻链是免疫球蛋白中分子量较小的肽链，能够自由通过肾小球基底膜的小分子蛋白质，在肾小管被重吸收回到血循环中，所以正常人尿中只有少量轻链存在。尿液特殊蛋白质控品包含轻链、免疫球蛋白G等多个项目，使用方便。但是，目前国内市售的轻链原料多为从血清中纯化而来，含有大量的干扰蛋白，不利于尿液复合质控品浓度调节。

为了解决上述问题，本发明提供了一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：

一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，包括以下步骤：

步骤一：将活化后的的羧基磁珠与链球菌蛋白G进行偶联，得到蛋白G磁珠；

步骤二：取蛋白G磁珠，加入轻链原料，混合均匀，在30-40℃下振荡，磁吸附，保留上清，弃去下层沉淀，得到纯化后的轻链原料；

步骤三：取缓冲液、纯化水，搅拌均匀，加入牛血清白蛋白、糖类、甘露醇、防腐剂，搅拌均匀，得到辅料；将辅料和尿液混合均匀，得到基质；

在基质、纯化后的轻链原料中加入尿液特殊蛋白，冷冻干燥，得到尿液特殊蛋白复合质控品；

所述尿液特殊蛋白为α2-巨球蛋白、免疫球蛋白轻链lambada、免疫球蛋白轻链K、尿微量白蛋白、免疫球蛋白G、胱抑素C、α1-微球蛋白、β2-微球蛋白、转铁蛋白、视黄醇结合蛋白、肌酐。

较为优化地，步骤一中，蛋白G磁珠的制备方法为：

取活化后的羧基磁珠，磁吸附，弃去上清，用缓冲液清洗1-3次，保留最后一次的清洗液，加入链球菌蛋白G，在30-40℃下振荡4-8h进行偶联，得到偶联反应后的磁珠；

取偶联反应后的磁珠，用缓冲液清洗，保留最后一次清洗液，得到蛋白G磁珠。

较为优化地，活化后的羧基磁珠与链球菌蛋白G的质量比为(5：1)～(30：1)。

较为优化地，所述活化后的羧基磁珠的制备方法为，包括以下步骤：

S1：取羧基磁珠、缓冲液于离心管中进行涡旋混匀，磁吸附，弃去上清；用缓冲液清洗，得到清洗后的羧基磁珠；

S2：将1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液加入至清洗后的羧基磁珠中，搅拌均匀，在30-40℃下振荡20-60min进行羧基活化，得到活化后的的羧基磁珠。

较为优化地，所述尿液特殊蛋白包括以下浓度的成分，0.1-60mg/L的α2-巨球蛋白、0.1-150mg/L的免疫球蛋白轻链Lambada、0.1-150mg/L的免疫球蛋白轻链K、5-800mg/L的尿微量白蛋白、0.1-200mg/L的免疫球蛋白G、0.3-8mg/L的胱抑素C、0.1-100mg/L的α1-微球蛋白、0.1-20mg/L的β2-微球蛋白、0.1-20mg/L转铁蛋白、0.2-20mg/L视黄醇结合蛋白、3.5-25mmol/L的肌酐。