[发明专利]一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法

权利要求书

1.一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤一：将活化后的的羧基磁珠与链球菌蛋白G进行偶联，得到蛋白G磁珠；

步骤二：取蛋白G磁珠，加入轻链原料混合均匀，在30-40℃下振荡，磁吸附，保留上清，弃去下层沉淀，得到纯化后的轻链原料；

步骤三：取缓冲液、纯化水，搅拌均匀，加入牛血清白蛋白、糖类、甘露醇、防腐剂，搅拌均匀，得到辅料；将辅料和尿液混合均匀，得到基质；在基质、纯化后的轻链原料中加入尿液特殊蛋白，冷冻干燥，得到尿液特殊蛋白复合质控品；

所述尿液特殊蛋白为α2-巨球蛋白、免疫球蛋白轻链lambada、免疫球蛋白轻链K、尿微量白蛋白、免疫球蛋白G、胱抑素C、α1-微球蛋白、β2-微球蛋白、转铁蛋白、视黄醇结合蛋白、肌酐。

2.根据权利要求1所述的一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：步骤一中，蛋白G磁珠的制备方法为：

取活化后的羧基磁珠，磁吸附，弃去上清，用缓冲液清洗1-3次，保留最后一次的清洗液，加入链球菌蛋白G，在30-40℃下振荡4-8h进行偶联，得到偶联反应后的磁珠；

取偶联反应后的磁珠，用缓冲液清洗，保留最后一次清洗液，得到蛋白G磁珠。

3.根据权利要求2所述的一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：活化后的羧基磁珠与链球菌蛋白G的质量比为(5：1)～(30：1)。

4.根据权利要求2所述的一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：所述活化后的羧基磁珠的制备方法为，包括以下步骤：

S1：取羧基磁珠、缓冲液于离心管中进行涡旋混匀，磁吸附，弃去上清；用缓冲液清洗，得到清洗后的羧基磁珠；

S2：将1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基硫代琥珀酰亚胺溶液加入至清洗后的羧基磁珠中，搅拌均匀，在30-40℃下振荡20-60min进行羧基活化，得到活化后的的羧基磁珠。

5.根据权利要求1所述的一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：所述尿液特殊蛋白包括以下浓度的成分，0.1-60mg/L的α2-巨球蛋白、0.1-150mg/L的免疫球蛋白轻链Lambada、0.1-150mg/L的免疫球蛋白轻链K、5-800mg/L的尿微量白蛋白、0.1-200mg/L的免疫球蛋白G、0.3-8mg/L的胱抑素C、0.1-100mg/L的α1-微球蛋白、0.1-20mg/L的β2-微球蛋白、0.1-20mg/L转铁蛋白、0.2-20mg/L视黄醇结合蛋白、3.5-25mmol/L的肌酐。

6.根据权利要求1所述的一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：步骤三中，基质包括以下成分，按照质量体积百分比为：40％-60％辅料、60％-40％尿液。

7.根据权利要求1所述的一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：所述辅料包括以下成分，按照质量百分比计：10mM-100mM缓冲液、1％-5％牛血清白蛋白、2％-10％糖类、2％-10％甘露醇、0.1％-0.5％防腐剂，其余为纯化水。

8.根据权利要求1所述的一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：步骤二中，轻链原料与蛋白G磁珠质量比为(1：23)～(1：1)。

9.根据权利要求1所述的一种磁珠纯化轻链原料制备尿液特殊蛋白质控品的方法，其特征在于：所述缓冲液为PB、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、甘氨酸中的任意一种或多种；

所述糖类为蔗糖、果糖、海藻糖中的任意一种或多种；

所述防腐剂为Proclin300、硫酸庆大霉素、NaN₃、K100中的任意一种或多种。