[发明专利]采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法

说明书

本发明公开了一种采用除磷脂板和液相色谱‑质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，以蛋白沉淀结合除磷脂板来制备样品，快速去除血浆中蛋白质和磷脂，有效地去除内源性的血浆蛋白和磷脂对待测物的干扰和离子抑制，采用液相色谱‑质谱法(LC‑MS/MS)检测，该方法可专属、灵敏、快速地测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度，主要适用于给予二甲双胍格列齐特片后人体血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的测定。

技术领域

本发明属于药物色谱、质谱分析技术领域，涉及化学品的检测方法，具体涉及一种生物样品中二甲双胍和格列齐特的检测方法，特别涉及一种采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法。

背景技术

二甲双胍为双胍类降糖药，可以提高靶细胞对胰岛素的敏感性，影响2型糖尿病患者脂肪代谢，提高葡萄糖的摄取和利用，同时具有改善血脂水平和纤溶蛋白活性作用。格列齐特属于磺脲类口服降糖药，通过与β细胞膜上的磺酰脲受体特异性结合，从而使钾离子通道关闭，引起膜电位改变，开启钙离子通道，使胞液内钙离子升高，促进胰岛素分泌，而降低血糖。两种药物作用机理互补，联合使用能提高治疗有效率，且药物不良反应发生风险并无明显增加。由江苏联环药业股份有限公司生产的二甲双胍格列齐特片(商品名：度和，含250mg二甲双胍和40mg格列齐特)，可以替代格列齐特片和二甲双胍片联用，治疗2型糖尿病患者。因此通过检测血浆中二甲双胍和格列齐特的浓度来调整给药剂量或时间，了解药物在体内的药代动力学特征，保证用药的安全性和有效性有重要意义。

目前同时检测人体血浆中二甲双胍和格列齐特浓度方法的文献仅一篇：Guo pingZhong等于2005年发表的一篇“Simultaneous determinationmetformin andg1ic1azidein human plasma by liquid chromatography-tandem mass spectrometry：applicationto a bioequivalence studytwo formulations in healthy volunteers”，但此文献采用的方法血浆用量大(200μL)，进样量大(20μL)，灵敏度较低(二甲双胍和格列齐特的定量限分别为7.8ng/mL和10ng/mL)，且样品中磷脂对二甲双胍测定有较明显的离子抑制，影响样品检测，无法满足二甲双胍和格列齐特联合用药后人体内浓度测定要求。针对上述文献方法的不足，需开发具有高灵敏度、低样品量、无离子抑制的液相色谱-质谱法，用于二甲双胍和格列齐特联合用药后，血浆中二甲双胍和格列齐特浓度得测定。

发明内容

针对现有技术中存在的缺陷，本发明提供采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，本发明方法可专属、灵敏、快速地测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度，主要适用于二甲双胍和格列齐特联合用药后人体血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的测定。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，包括以下步骤：

S1：配制混合标曲工作液：

S101：配制浓度为0.2mg/mL二甲双胍-甲醇溶液，作为二甲双胍储备液1；

S102：配制浓度为0.2mg/mL格列齐特-甲醇溶液，作为格列齐特储备液1；

S103：将二甲双胍储备液1与格列齐特储备液1按体积比2：1混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含80～32000ng/mL二甲双胍、40～16000ng/mL格列齐特的混合标曲工作液；

S2：配制标曲样品：将S1所得混合标曲工作液加入空白血浆中，控制混合标曲工作液与空白血浆的体积比为1：19，得到含4～1600ng/mL二甲双胍、2～800ng/mL格列齐特的标曲样品；

S3：配制混合质控工作液：