[发明专利]采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法

权利要求书

1.采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：配制混合标曲工作液：

S101：配制浓度为0.2mg/mL二甲双胍-甲醇溶液，作为二甲双胍储备液1；

S102：配制浓度为0.2mg/mL格列齐特-甲醇溶液，作为格列齐特储备液1；

S103：将二甲双胍储备液1与格列齐特储备液1按体积比2:1混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含80～32000ng/mL二甲双胍、40～16000ng/mL格列齐特的混合标曲工作液；

S2：配制标曲样品：将S1所得混合标曲工作液加入空白血浆中，控制混合标曲工作液与空白血浆的体积比为1：19，得到含4～1600ng/mL二甲双胍、2～800ng/mL格列齐特的标曲样品；

S3：配制混合质控工作液：

S301：配制浓度为0.2mg/mL二甲双胍-甲醇溶液，作为二甲双胍储备液2；

S302：配制浓度为0.2mg/mL格列齐特-甲醇溶液，作为格列齐特储备液2；

S303：将二甲双胍储备液2与格列齐特储备液2按体积比2:1混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含80～24000ng/mL二甲双胍、40～12000ng/mL格列齐特的混合质控工作液；

S4：配制质控样品：将S3所得混合质控工作液加入空白血浆中，控制混合质控工作液与空白血浆的体积比为1：19，得到含4～1200ng/mL二甲双胍、2～600ng/mL格列齐特的质控样品；

S5：配制混合内标工作液：

S501：配制0.2mg/mL二甲双胍-d₆-甲醇溶液，作为二甲双胍-d₆储备液；

S502：配制0.2mg/mL格列齐特-d₄-甲醇溶液，作为格列齐特-d₄储备液；

S503：按照体积比1：1将二甲双胍-d₆储备液、格列齐特-d₄储备液混合后，用50v/v％甲醇水溶液进行稀释，配制成含500ng/mL二甲双胍-d₆、500ng/mL格列齐特-d₄的混合内标工作液；

S6：前处理：

S601：标曲样品、质控样品前处理：取不同浓度标曲样品、质控样品各50μL至OstroTM96孔磷脂去除板中，加入50μL混合内标工作液，加入300μL沉淀剂乙腈，涡旋5min，负压操作10min，使用2mL的赛默飞96孔深孔板收集洗脱后的样品，样品在40℃的N₂流中干燥，用300μL的纯乙腈溶液复溶，5μL进样分析；

S602：待测样品前处理：取50μL血浆至OstroTM 96孔磷脂去除板中，加入50μL混合内标工作液，加入300μL沉淀剂乙腈，涡旋5min，负压操作10min，使用2mL的赛默飞96孔深孔板收集洗脱后的样品，样品在40℃的N₂流中干燥，用300μL的纯乙腈溶液复溶，5μL进样分析；

S7：液相色谱-质谱法检测：通过液相色谱-质谱法检测，基于待测物与内标的峰面积比，通过归一化法得到标准曲线，从而定量得到生物样品中二甲双胍和格列齐特的浓度。

2.根据权利要求1所述的采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，其特征在于，所述S1混合标曲工作液中的二甲双胍浓度分别为80、160、800、3200、8000、16000、25600、32000ng/mL，格列齐特浓度分别为40、80、400、1600、4000、8000、12800、16000ng/mL。

3.根据权利要求1所述的采用除磷脂板和液相色谱-质谱法测定人血浆中二甲双胍和格列齐特浓度的快速方法，其特征在于，所述S2标曲样品中的二甲双胍浓度分别为4ng/mL、8ng/mL、40ng/mL、160ng/mL、400ng/mL、800ng/mL、1280ng/mL、1600ng/mL，格列齐特浓度分别为2ng/mL、4ng/mL、20ng/mL、80ng/mL、200ng/mL、400ng/mL、640ng/mL、800ng/mL。