[发明专利]一种基于催乳素受体生物效应的增乳膏质量评价方法

说明书

本发明涉及PRLR蛋白作为中药质量标志物在增乳膏质量评价中的应用，其中基于PRLR蛋白的增乳膏质量评价方法具体包括如下步骤：1)蛋白芯片的构建；2)供试品溶液的制备；3)对照品溶液的制备；4)分别取供试品溶液和对照品溶液进样进行SPR检测，本发明经Q‑biomarker活性验证筛选得到9个活性化合物，经方法学优化和验证，建立了基于PRLR生物效应的增乳膏质量检测方法，实现增乳膏主要临床疗效的科学评价，进一步完善了增乳膏的质量控制体系，具备实际推广应用价值。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及基于催乳素受体生物效应的增乳膏质量评价方法。

背景技术

增乳膏收载于国家药品标准WS-5163(B-0163).2002，是由王不留行、通草、熟地黄、当归、白芍、川芎、益母草、天花粉共八味中药制成的煎膏剂，具有补血活血，通络催乳的作用。目前有关增乳膏质量研究的报道较少。宋丽军等，HPLC测定益母增乳膏中阿魏酸的含量[J],吴丽璇,高效液相色谱法测定增乳膏中芍药苷的含量[J],以及中国发明专利CN1188160C都仅针对单个活性成分对增乳膏进行质量控制。由于中药方剂具有多成分、多靶点的特点，以单一成分含量进行质量评价难以充分反映中药整体质量。

中药质量标志物是存在于中药材和中药产品(如中药饮片、中药煎剂、中药提取物、中成药制剂)中固有的或加工制备过程中形成的、与中药的功能属性密切相关的化学物质，是反映中药安全性和有效性的标志性物质。基于中药质量标准物有望建立更为科学有效的中药质量评价方法。但目前还没有用中药质量标志物对增乳膏质量控制的相关报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，探索并建立了一种反映和评价增乳膏药理作用的生物效应检测方法，用以弥补现有增乳膏质量标准与临床有效性、安全性关联不紧密的问题，进一步完善增乳膏的质量控制体系。

基于此，本发明提供了PRLR蛋白作为中药质量标志物在增乳膏质量评价中的应用。

本发明还提供了一种增乳膏质量评价方法，它包括如下步骤：

A、采用表面等离子体共振法检测增乳膏的RU值和苯甲酰芍药苷的RU值，其中以PRLR蛋白构建蛋白芯片；

B、采用以下公式计算比值：增乳膏的RU值/苯甲酰芍药苷的RU值；

C、步骤B所述的比值大于或等于1时，增乳膏的生物效应评价为合格。

进一步地，所述表面等离子体共振法检测增乳膏具体包括如下步骤：

A₁蛋白芯片的构建：取PRLR蛋白加水溶解，再加醋酸钠缓冲液稀释成30～50μg/ml的蛋白溶液，取蛋白溶液，与传感器芯片偶联，即得；

A₂供试品溶液的制备：取增乳膏，加80％甲醇溶液提取，提取液离心，取上层清液干燥，加DMSO复溶，过滤，滤液加PBS溶液混匀，即得；

A₃对照品溶液的制备：取苯甲酰芍药苷，加DMSO溶解，溶解液加PBS溶液和含DMSO的PBS溶液混匀，即得；

A₄分别取步骤A₂所得供试品溶液和步骤A₃所得对照品溶液，置于载有步骤A₁所得蛋白芯片的表面等离子共振测试孔板中；

SPR检测条件：运行时间：60s；流速：30μl/min，解离时间：60s，温度：25℃，运行缓冲液：5％DMSO的PBS。

进一步地，步骤A₁所述醋酸钠缓冲液的浓度为10mM，pH值为4.5；所述蛋白溶液为50μg/ml。