[发明专利]一种基于催乳素受体生物效应的增乳膏质量评价方法

权利要求书

1.PRLR蛋白作为中药质量标志物在增乳膏质量评价中的应用。

2.一种增乳膏质量评价方法，其特征在于：它包括如下步骤：

A、采用表面等离子体共振法检测增乳膏的RU值和苯甲酰芍药苷的RU值，其中以PRLR蛋白构建蛋白芯片；

B、采用以下公式计算比值：增乳膏的RU值/苯甲酰芍药苷的RU值；

C、步骤B所述的比值大于或等于1时，增乳膏的生物效应评价为合格。

3.根据权利要求2所述的增乳膏质量评价方法，其特征在于：所述表面等离子体共振法检测增乳膏具体包括如下步骤：

A₁蛋白芯片的构建：取PRLR蛋白加水溶解，再加醋酸钠缓冲液稀释成30～50μg/ml的蛋白溶液，取蛋白溶液，与传感器芯片偶联，即得；

A₂供试品溶液的制备：取增乳膏，加80％甲醇溶液提取，提取液离心，取上层清液干燥，加DMSO复溶，过滤，滤液加PBS溶液混匀，即得；

A₃对照品溶液的制备：取苯甲酰芍药苷，加DMSO溶解，溶解液加PBS溶液和含DMSO的PBS溶液混匀，即得；

A₄分别取步骤A₂所得供试品溶液和步骤A₃所得对照品溶液，置于载有步骤A₁所得蛋白芯片的表面等离子共振测试孔板中；

SPR检测条件：运行时间：60s；流速：30μl/min，解离时间：60s，温度：25℃，运行缓冲液：5％DMSO的PBS。

4.根据权利要求3所述的增乳膏质量评价方法，其特征在于：步骤A₁所述醋酸钠缓冲液的浓度为10mM，pH值为4.5；所述蛋白溶液为50μg/ml。

5.根据权利要求3所述的增乳膏质量评价方法，其特征在于：步骤A₁所述偶联为氨基偶联；所述氨基偶联的参数为传感器芯片型号：CM7或CM5，接触时间：420s，流速：10μl/min，温度：25℃，偶联试剂：EDC和NHS，封闭用试剂：乙醇胺，运行缓冲液：1×HBS-EP。

6.根据权利要求5所述的增乳膏质量评价方法，其特征在于：所述传感器芯片型号：CM7，所述蛋白溶液、EDC和NHS、乙醇胺的体积比为100：200：140；所述EDC和NHS的体积比为1：1。

7.根据权利要求3所述的增乳膏质量评价方法，其特征在于：步骤A₂所述增乳膏与80％甲醇溶液的质量体积比为0.1g：5～25ml；所述提取为超声提取，时间20～60min，功率20～80kHz,100～500W；所述离心的速度5000～25000r，时间5～25min；所述DMSO的加入量为上清液的15～25倍。

8.根据权利要求3所述的增乳膏质量评价方法，其特征在于：步骤A₃所述溶解液中苯甲酰芍药苷的浓度为10mM；所述溶解液、PBS溶液和含DMSO的PBS溶液的体积比为5μl：95μl：900μl。

9.根据权利要求3所述的增乳膏质量评价方法，其特征在于：所述含DMSO的PBS溶液中DMSO浓度为5％。