[发明专利]一种抗CD123的纳米抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗CD123的纳米抗体及其制备方法和应用，涉及生物医药领域。本发明从双峰驼VHH免疫文库中筛选到的抗CD123纳米抗体，其可特异性的结合CD123抗原，且亲和力较好，人源化后通过抗体亲和力的测定可知，人源化纳米抗体亲和力在10supgt;‑12/supgt;～10supgt;‑9/supgt;M数量级之间，都属于高亲和力纳米抗体。此外，将筛选获得的纳米抗体作为抗原结合结构域构建嵌合抗原受体，并利用CRISPR/Cas9RNPs系统敲除T细胞的TRAC和B2M基因，制备通用型CAR‑T细胞，对CD123阳性的急性髓系白血病细胞系具有明显的杀伤活性，并且最大限度地降低移植物抗宿主反应。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体而言，涉及一种抗CD123的纳米抗体及其制备方法和应用。

背景技术

急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是一种异质性血液系统恶性肿瘤，其特征是骨髓中出现不同成熟阶段的异常原始细胞，干扰正常的造血功能。据美国癌症协2022年初公布的最新数据显示，美国新发白血病病例约60650例，死亡约24000例，其中急性髓性白血病占20050例。人们第一次被诊断出患有AML时的平均年龄约为68岁，发病较晚，但AML也可能发生在儿童身上。目前，由于针对AML化疗方案仅对少数的患者有效，异基因造血干细胞移植(HSCT)仍然是AML主要的治疗手段，但只有少数患者符合条件。此外，50-70％的患者在接受化疗和异基因造血干细胞移植后出现复发，复发患者治疗后的二次缓解率低于50％，5年生存率低至27％。因此，复发性和难治性使得AML在很大程度上仍然无法治愈。

随着过继细胞治疗(adoptive cellular therapy,ACT)的发展，在恶性血液肿瘤中，自体嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞疗法在抗肿瘤方面显示出较好的效果，提高了多种血液瘤患者的缓解率及生存率，使血液瘤的治疗方式发生了较大的变化，并推动了其他免疫细胞疗法的发展。迄今为止，最成功的CAR-T细胞治疗是自体CD19-CAR-T细胞治疗复发或难治性CD19阳性急性淋巴细胞白血病患者。多个研究机构开发了多种不同的CD19-CAR-T结构和制备方法，且疗效显著。尽管CAR-T细胞在淋巴细胞白血病和多发性骨髓瘤等血液瘤表现出较好治疗效果，但在AML中由于靶抗原的识别困难，CAR-T细胞疗法面临各种挑战，目前，极少有获批CAR-T细胞疗法用于治疗AML。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗CD123的纳米抗体及其制备方法和应用。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供了一种抗CD123的纳米抗体，所述纳米抗体包括：CDR1～3的氨基酸序列如以下任一项所示的重链可变区：(1)如SEQ ID No.1～3所示；(2)如SEQ ID No.6～8所示；(3)如SEQ ID No.11～13所示；(4)如SEQ ID No.16～18所示；(5)如SEQ ID No.21～23所示；(6)如SEQ ID No.26～28所示；(7)如SEQ ID No.31～33所示；(8)如SEQ ID No.36～38所示；(9)如SEQ ID No.41～43所示；(10)如SEQ ID No.46～48所示；(11)如SEQ ID No.51～53所示；(12)如SEQ ID No.56～58所示；(13)如SEQ ID No.61～63所示；(14)如SEQ ID No.66～68所示；(15)如SEQ ID No.71～73所示；(16)如SEQ ID No.76～78所示；(17)如SEQ ID No.81～83所示；(18)如SEQ ID No.86～88所示；(19)如SEQ IDNo.91～93所示；(20)如SEQ ID No.96～98所示；(21)如SEQ ID No.101～103所示。

第二方面，本发明实施例提供了一种分离的核酸，其编码如前述任意实施例所述的抗CD123的纳米抗体。