[发明专利]用于检测犬冠状病毒的引物探针组合物、试剂盒及方法在审
| 申请号： | 202211673816.1 | 申请日： | 2022-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN116083651A | 公开（公告）日： | 2023-05-09 |
| 发明（设计）人： | 胡雨晴;张炳为 | 申请（专利权）人： | 苏州中科先进技术研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙) 44316 | 代理人： | 张俊锋 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 冠状病毒 引物 探针 组合 试剂盒 方法 | ||
1.一种用于检测犬冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于，包括：
正向引物，其序列为：5’-GCTTACACATCGTACACTGA-3’；
反向引物，其序列为：5’-CTAACAACCTGCTCATTGGT-3’；
探针，其核酸序列为：5’-GATCTTGGTATGAAGCGTAGTGGTTA-3’。
2.如权利要求1所述的用于检测犬冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。
3.如权利要求2所述的用于检测犬冠状病毒的引物探针组合物，其特征在于：所述荧光报告基团选自FAM、VIC、JOE、TET、CY3、CY5、ROX、Texas RED或LC RED460中的一种，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2或BHQ3中的一种。
4.一种用于检测犬冠状病毒的试剂盒，其特征在于：包括PCR反应液；所述PCR反应液包括权利要求1-3任意一项所述的用于检测犬冠状病毒的引物探针组合物。
5.如权利要求4所述的用于检测犬冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括：1-5mM MgCl2，20-50mM Tris，100-500mg/L BSA，10-100uM dNTPs，0.1-1.0uM正向引物，0.1-1.0uM反向引物，0.1uM荧光探针组成。
6.如权利要求4所述的用于检测犬冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶混合液；所述酶混合液包括40U/μL的RNA酶、抑制剂、25U/μL的逆转录酶和5U/μL的Taq酶混合组成。
7.如权利要求4所述的用于检测犬冠状病毒的试剂盒，其特征在于：还包括阳性对照和阴性对照。
8.如权利要7所述的用于检测犬冠状病毒的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照为临床上收集犬冠状病毒强阳性样本；所述阴性对照为超纯水。
9.一种用于检测犬冠状病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测样本的DNA；
(2)以待测样本的DNA为模板，进行荧光定量PCR反应，所述PCR反应体系包括权利要求1-3任意一项所述的用于检测犬冠状病毒的引物探针组合物；
(3)PCR反应结束后，根据Ct值判定检测结果。
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