[发明专利]一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法

说明书

本发明公开了一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法，属于生物技术领域，该方法首先采用一步沉淀法制备磁性类过氧化物酶，然后利用静电作用将噬菌体定向固定在磁性类过氧化物酶，制备SapYZU15@Fesubgt;3/subgt;Osubgt;4/subgt;，最后，利用TMB比色反应，快速可视化定量分析金黄色葡萄球菌；与之前报道的金黄色葡萄球菌检测方法相比，本发明具有检测速度快、特异性好、灵敏性高、设备依赖度低、操作简单、成本低廉等特点，适合食品样本中金黄色葡萄球菌的可视化快速检测要求。

技术领域

本发明涉及一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法，属于生物技术领域。

背景技术

金黄色葡萄球菌是人类和动物共生菌群的一部分，可导致从轻微的皮肤感染到危及生命的疾病，如肺炎、中毒性休克综合征和败血症。MDR和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)因其表型可塑性和适应性，在临床和牲畜相关的环境和食物链中经常被检测到。因此，准确、快速地检测和识别金黄色葡萄球菌不仅在公共卫生方面，而且在医疗诊断、食品安全、环境监测方面都具有特别重要的意义。

快速、有效、准确地诊断金黄色葡萄球菌对于快速治疗感染患者、防止感染传播和减少耐药菌株的形成具有重要意义。以培养为基础的传统检测金黄色葡萄球菌的方法，虽然便宜、简单并可以获得定性和定量的结果，但其费力、耗时、操作复杂且很难满足实际需求。近年来，许多非培养技术检测病原菌的方法快速发展并应用，例如，分子生物学方法(如DNA芯片)和免疫学方法(如酶联免疫吸附测定法)。尽管这些方法检测金黄色葡萄球菌具有特异性好、灵敏度高等优点，但却需要昂贵的设备和训练有素的实验室分析人员，以及复杂的样品制备过程。因此，制备出一种能克服干扰且快速、简便、特异、灵敏的金黄色葡萄球菌检测方法具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是针对以上背景技术中的技术问题，提供一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种检测金黄色葡萄球菌的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶，包括金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha、聚乙烯亚胺和Fe₃O₄，金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha以金黄色葡萄球菌ATCC29213为宿主菌，通过静电作用，利用聚乙烯亚胺将金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha头部固定在Fe₃O₄表面，金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha尾部裸露在外，能够特异性捕获金黄色葡萄球菌。

所述金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha的保藏编号为CCTCC NO：M2022023(制备方法参考中国专利文献CN 114807058 A记载的方法)。

一种噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法，所述方法如下：

步骤S1：噬菌体的分离与纯化，得到噬菌体悬液；

步骤S2：制备PEI@Fe₃O₄溶液；

步骤S3：取步骤S1中得到的噬菌体悬液与步骤S2中得到的PEI@Fe₃O₄溶液进行混合，孵化，得到SapYZU15@PEI@Fe₃O₄溶液。

优选的，所述步骤S1具体如下：步骤S1-1：采集扬州市某菜市场及周边污水，取50mL污水，离心机中8000rpm离心10min，依次用0.45μm和0.22μm无菌滤膜过滤杂质，取上清液；

步骤S1-2：取步骤S1-1中的上清液3mL与等量的2×LB液体培养基混合，并加入100μL金黄色葡萄球菌ATCC 29213菌悬液，37℃下过夜培养，离心过滤得到粗噬菌体裂解液；