[发明专利]一种基于噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的金黄色葡萄球菌比色分析方法

权利要求书

1.一种检测金黄色葡萄球菌的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶，其特征在于，包括金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha、聚乙烯亚胺和Fe₃O₄，金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha以金黄色葡萄球菌ATCC 29213为宿主菌，通过静电作用，利用聚乙烯亚胺将金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha头部固定在Fe₃O₄表面，金黄色葡萄球菌噬菌体SapYZUalpha尾部裸露在外，能够特异性捕获金黄色葡萄球菌。

2.权利要求1所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法，其特征在于，所述方法如下：

步骤S1：噬菌体的分离与纯化，得到噬菌体悬液；

步骤S2：制备PEI@Fe₃O₄溶液；

步骤S3：取步骤S1中得到的噬菌体悬液与步骤S2中得到的PEI@Fe₃O₄溶液进行混合，孵化，得到SapYZU15@PEI@Fe₃O₄溶液。

3.根据权利要求2所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体如下：步骤S1-1：采集扬州市某菜市场及周边污水，取50mL污水，离心机中8000rpm离心10min，依次用0.45μm和0.22μm无菌滤膜过滤杂质，取上清液；

步骤S1-2：取步骤S1-1中的上清液3mL与等量的2×LB液体培养基混合，并加入100μL金黄色葡萄球菌ATCC 29213菌悬液，37℃下过夜培养，离心过滤得到粗噬菌体裂解液；

步骤S1-3：向含有5mL的LB半固体培养基的无菌离心管中加入步骤S1-2中的裂解液和金黄色葡萄球菌ATCC 29213菌悬液各100μL，立即倾倒在底层LB固体培养基上，制成双层平板，在37℃下过夜培养；

步骤S1-4：挑取单个步骤S1-3中双层平板的噬菌体空斑于含有100μL金黄色葡萄球菌ATCC 29213菌悬液的LB试管中，置于37℃、125rpm条件下培养，次日取出，离心过滤得到噬菌体裂解液；

步骤S1-4：将步骤S1-4中的裂解液按照步骤S1-3和步骤S1-4中的方法交替进行，直至双层平板上形成的明亮清澈、大小均一的噬菌体空斑，制成噬菌体悬液。

4.根据权利要求2所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体如下：

步骤S2-1：将5.63g无水氯化铁和5.0g七水硫酸亚铁分散在400mL去离子水中，超声溶解10min；

步骤S2-2：步骤S2-1得到的混合物在85℃条件下，通入氮气并搅拌30min；

步骤S2-3：向步骤S2-2中加入100mL氢氧化铵、0.306g柠檬酸三钠和10.4g聚乙烯亚胺，搅拌30min直至完全溶解；

步骤S2-4：将步骤S2-3中得到溶液，利用磁铁进行磁分离并收集合成的Fe₃O₄，用乙醇和去离子水交替洗涤5-8次，制成PEI@Fe₃O₄溶液。

5.根据权利要求4所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法，其特征在于，步骤S2-3中所述聚乙烯亚胺的分子量为10000。

6.根据权利要求2所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法，其特征在于，所述步骤S3具体如下：按体积比，分别取PEI@Fe₃O₄溶液2份、噬菌体悬液1份进行混合，涡旋30s，在37℃、125rpm条件下培养6h，制成SapYZU15@PEI@Fe₃O₄溶液。

7.根据权利要求2所述的噬菌体修饰磁性类过氧化物酶的制备方法，其特征在于，所述噬菌体悬液的浓度为10⁹PFU/mL。