[发明专利]利用液相色谱-串联质谱同时定量分析利伐沙班、阿哌沙班、艾多沙班和贝曲沙班的方法

说明书

本发明提供一种利用高效液相色谱‑串联质谱联用装置同时定量分析利伐沙班、阿哌沙班、艾多沙班和贝曲沙班的方法，所述方法包括以下步骤：1)制备含有利伐沙班、阿哌沙班、艾多沙班和贝曲沙班的样品溶液；2)将所述样品溶液注入到高效液相色谱‑串联质谱联用装置中，获得质量色谱图；3)根据所述质量色谱图使用内标法对利伐沙班、阿哌沙班、艾多沙班和贝曲沙班进行定量分析，其中，所述高效液相色谱中使用由流动相A和流动相B组成的混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为含0.05体积％至0.25体积％甲酸和1mmol/L至10mmol/L甲酸铵的水溶液，所述流动相B为含0.05体积％至0.30体积％甲酸的乙腈‑甲醇溶液，其中所述流动相B中的乙腈与甲醇的体积比为2：1至5：1。

技术领域

本发明涉及生物化学和药物分析化学领域，具体而言，涉及一种利用高效液相色谱-串联质谱联用技术同时定量分析4种直接口服抗凝药(DOAC)即利伐沙班、阿哌沙班、艾多沙班和贝曲沙班的方法。

背景技术

液相色谱-质谱分析法主要应用于药物代谢、药物动力学、临床药理学、天然药物开发等领域。其具有高灵敏度、高特异性、重现性好、定量准确、线性范围宽、数据处理简单等优点。高效液相色谱能够有效地将待测物的成分分离开，而质谱能够对分开的成分逐个地进行定性定量分析。液相色谱-质谱分析法是利用试样各组分在色谱柱中的流动相和固定相间的分配和吸附系数不同，由流动相把试样带入色谱柱中进行分离后，经接口装置，不同的离子碎片在不同的电场和/或磁场的运动行为不同，质量分析器把电离子按质荷比(m/z)分开，得到依质量顺序排列的质谱图。通过对质谱图的分析处理，可以得到样品的定性、定量分析结果。

利伐沙班、阿哌沙班、艾多沙班和贝曲沙班是新一代直接口服抗凝药(DirectOral Anticoagulant，DOAC)，具有起效快、药理作用可预测和出血倾向低等特点，通常在无需常规实验室监测的情况下以固定剂量给药。然而，在新型抗凝药物的使用过程中，存在着一定的出血风险，尤其在使用剂量较大时，出血和凝血功能障碍都是不可忽视的严重问题。血浆中DOAC水平与不良结果之间存在关联。较低的DOAC血浆谷浓度增加了房颤患者发生严重中风的风险，小于50ng/mL可能是一个独立的风险因素。对于需要手术或侵入性治疗的DOAC患者，术前停药已达成共识并且血浆中DOAC的水平需降至30ng/mL以下，以防止任何出血事件。迄今为止，与不良结果相关的DOAC浓度尚未明确定义。因此，对于某些患者来说，药物浓度监测可能是必要的。

四种常见的直接口服抗凝药分子结构式如下所示。

A)利伐沙班，B)阿哌沙班，C)艾多沙班，和D)贝曲沙班

现有的DOAC检测方法大多数只检测一种药物且样本制备方法比较繁琐，随着使用多种DOAC治疗的患者的增加，这些方法不能满足当前实验室监测的需要。多分析物检测方法避免了实验室中单一分析物方法的频繁切换，统一的样品制备方法消除了繁琐的程序，这是未来临床实验室监测的必然趋势，但目前仅有少数报道。已有的少数几篇多分析物检测方法，样本制备时间长、操作步骤复杂，实验材料成本高，并且通常需要100～1000μL血浆样本(GOUVEIA F等人，Liquid chromatographic methods for the determination ofdirect oral anticoagulant drugs in biological samples：A critical review[J].Analytica Chimica Acta，2019，1076：18-31.)，这意味着血药浓度监测可能导致患者出现不同程度贫血。