[发明专利]一种亲和试剂及其分离方法、检测蛋白质中水杨酰化赖氨酸的方法

说明书

本发明公开了一种亲和试剂及其分离方法、检测蛋白质中水杨酰化赖氨酸的方法，涉及蛋白质翻译后修饰检测试剂与检测方法技术领域。发明人发现一种新型的蛋白质翻译后修饰：赖氨酸水杨酰化。其可作为一种新的表观遗传并且证明关键代谢酶的水杨酰化可抑制代谢酶活性从而抑制糖酵解。本发明不仅进一步证实了赖氨酸水杨酰化(Ksa)修饰与蛋白酶活性相关，Ksa修饰可影响糖酵解和细胞增殖，还为研究水杨酰化的功能及其在各种病理生理状况中发挥的作用掀开了新的篇章。

技术领域

本发明涉及蛋白质翻译后修饰检测试剂与检测方法技术领域，具体而言，涉及一种亲和试剂及其分离方法、检测蛋白质中水杨酰化赖氨酸的方法。

背景技术

阿司匹林是目前世界上最常用的药物之一，主要用于治疗疼痛、发热和炎症，也能降低非致死性心肌梗死和心血管疾病的发病率。另外，阿司匹林拥有预防癌症的能力，有遗传倾向的结直肠癌高危人群服用阿司匹林，患癌风险将减半，且预防作用可维持10-20年。对已确诊的结直肠癌患者，服用阿司匹林也可降低结直肠癌的死亡率。

研究表明，阿司匹林主要通过两种机制发挥治疗作用。第一种机制是阿司匹林进入体内成为乙酰基供体，促进重要功能蛋白的乙酰化过程。例如，阿司匹林能增强环氧合酶1(COX1)和环氧合酶2(COX2)活性位点的丝氨酸530位和516位的乙酰化，抑制COX1和COX2活性，阻碍花生四烯酸转化为血栓素A2或前列腺素E2，发挥抗炎作用。阿司匹林还可以乙酰化一氧化氮复合酶的赖氨酸，调节内皮细胞的一氧化氮生成。第二种机制是阿司匹林作为小分子抑制剂，抑制靶蛋白活性。例如，蛋白磷酸酶2A(PP2A)是机体内重要的磷酸酶之一，介导底物蛋白(如β-catenin，Wnt信号转导的关键蛋白)的去磷酸化过程。阿司匹林能结合并抑制PP2A活性，促进β-catenin特定氨基酸残基(T41和S45)的磷酸化，激活β-catenin的泛素化降解，下调β-catenin蛋白水平，抑制肿瘤细胞的Wnt信号通路，从而达到预防结直肠癌的目的。然而，上述两种机制尚无法完全解释阿司匹林的治疗作用，阿司匹林是否还存在其它分子机制执行生物学功能？

目前已发现了超过400种蛋白质翻译后修饰，包括乙酰化、泛素化、磷酸化、糖基化、甲基化等。各种修饰会改变蛋白质的电荷状态、疏水性、蛋白质构象等性质，最终动态调控蛋白质功能。赖氨酸苯甲酰化修饰是第一种被发现的芳香环修饰，具有修饰体积大、疏水性强等特征，主要调节甘油磷酸代谢、卵巢类固醇生成等过程。考虑到阿司匹林的分子结构以及在体内的代谢特点与苯甲酰化类似，那么阿司匹林是否可以通过赖氨酸水杨酰化(Ksa)来影响蛋白功能？

因而，目前需要开发与阿司匹林治疗的各种疾病和症状相关的蛋白质赖氨酸水杨酰化修饰的试剂和方法。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种亲和试剂及其分离方法、检测蛋白质中水杨酰化赖氨酸的方法以解决上述技术问题。

本发明是这样实现的：

本文中使用的术语“肽”是指通过肽键连接的两个或多个氨基酸的线性链。多肽可包括约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、40、50、100、200或更多的氨基酸。肽的氨基酸可以被修饰、删除、添加或者取代。肽可以通过本领域已知的常规技术手段获得，例如通过酶消化从天然或充足蛋白质中合成或获得。

本文中使用的术语“多肽”指至少四个氨基酸、最好是在约在20个氨基酸左右的多肽，而不考虑翻译后修饰。本文中使用的术语“蛋白质”是由一种货多种多肽组成的生物分子，而不考虑翻译后修饰。蛋白质中的每一种多肽都可以是一个亚单元。多肽或者蛋白质可以是天然的或修饰的形式，并且可以表现出生物功能和特征。