[发明专利]一种融合囊泡，其制备方法、纳米药物递送系统和应用

权利要求书

1.一种融合囊泡，其特征在于，所述融合囊泡包括T细胞膜囊泡和负载有光热剂的热敏脂质体；其中，

所述T细胞膜囊泡的来源为表面高表达PD-1蛋白的T淋巴细胞，优选选自以下一种或多种：提取自体内的T淋巴细胞、PD-1高表达的细胞稳转株、T淋巴细胞系；更优选为T淋巴细胞系，最优选为EL4细胞；和/或

所述负载光热剂的热敏脂质体包括磷脂酰胆碱、聚乙二醇衍生化磷脂和光热剂。

2.根据权利要求1所述的融合囊泡，其特征在于：

所述融合囊泡的粒径为50nm～500nm，优选为100nm～250nm，更优选为100nm～200nm；和/或

所述负载光热剂的热敏脂质体与T细胞膜囊泡的融合质量比为0.1～10∶0.1～10，优选为0.5～5∶0.1～5，最优选为2∶1。

3.根据权利要求1或2所述的融合囊泡，其特征在于，所述负载光热剂的热敏脂质体中：所述磷脂酰胆碱形成磷脂双分子层，所述光热剂被所述磷脂双分子层包裹，所述聚乙二醇衍生化磷脂中的磷脂穿插于所述磷脂双分子层中；

优选地，所述磷脂酰胆碱和聚乙二醇衍生化磷脂的摩尔比为1～15∶0.05～1.5，优选为5～10∶0.08～1.3，最优选为9∶1；和/或

优选地，所述光热剂和所述磷脂双分子层的磷脂的质量比为0.5～1∶20～100，优选为1∶30～70，最优选为1∶50。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合囊泡，其特征在于：

所述磷脂酰胆碱选自以下一种或多种：1,2-二硬脂酰-sn-甘油磷酸、1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱、1,2-二月桂酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱，二棕榈酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基卵磷脂，优选选自以下一种或多种：1,2-二月桂酰基-Sn-甘油基-3-磷酸胆碱，二棕榈酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基卵磷脂，更优选为二棕榈酰磷脂酰胆碱和/或1-肉豆蔻酰基-2-硬脂酰基卵磷脂；

所述聚乙二醇衍生化磷脂选自以下一种或多种：聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺、聚乙二醇-胆固醇、甲氧基-聚乙二醇-双肉豆蔻磷脂酰乙醇胺，优选为聚乙二醇-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺和/或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺，最优选为聚乙二醇2000-二-硬脂酰基磷脂酰乙醇胺；和/或

所述光热剂为具有高光热转换效率的材料，优选选自以下一种或多种：金纳米材料、碳纳米材料、半导体纳米材料、近红外染料，更优选为近红外染料，最优选为吲哚菁绿。

5.制备权利要求1至4中任一项所述的融合囊泡的方法，其特征在于，所述负载光热剂的热敏脂质体和所述T细胞膜囊泡通过磷脂双分子层融合的方法进行融合；

优选地，所述方法包括以下步骤：

(1)制备T细胞膜囊泡；

(2)制备负载光热剂的热敏脂质体；

(3)将步骤(2)所制备的负载光热剂的热敏脂质体与步骤(1)所制备的T细胞膜囊泡融合，得到所述融合囊泡。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中还包括：

(a)提取T细胞细胞膜；

(b)分离T细胞膜囊泡；

优选地，所述步骤(a)中还包括：T细胞培养并离心收集，裂解细胞并收集T细胞膜；所述裂解细胞的方法更优选选自以下一种或多种：超声、反复冻融、挤出；所述离心的方法更优选为梯度离心；和/或

优选地，所述步骤(b)中还包括：挤出所述步骤(a)中得到的T细胞膜并超速离心得到T细胞膜囊泡；所述超速离心的转速更优选为120000～150000g，最优选为150000g；所述超速离心的时间更优选为1～2h，最优选为1.5h；所述挤出的次数更优选为8～15次，进一步优选为10～15次。