[发明专利]利用RNA环化技术制备寡肽的方法及寡肽的表达DNA

权利要求书

1.一种利用RNA环化技术制备寡肽的方法，其特征在于其步骤包括：

(1)构建寡肽的表达DNA，该表达DNA包括自环化序列1-起始密码子-串联重复的寡肽编码DNA-RBS序列-自环化序列2；

(2)将上述构建的寡肽的表达DNA构建到表达载体上，转入宿主细胞中进行表达，得到融合寡肽；

(3)表达后的融合寡肽进行纯化；

(4)纯化后的融合寡肽使用蛋白酶切割分离；

(5)纯化分离后的寡肽。

2.根据权利要求1所述的利用RNA环化技术制备寡肽的方法，其特征在于：

所述表达DNA包括自环化序列1-起始密码子-亲和标签/分泌标签/自聚集标签-串联重复的寡肽编码DNA-RBS序列-自环化序列2。

3.根据权利要求1或2所述的利用RNA环化技术制备寡肽的方法，其特征在于所述自环化序列1的序列如SEQ ID No.1所示，所述自环化序列2的序列如SEQ ID No.2所示。

4.根据权利要求1或2所述的利用RNA环化技术制备寡肽的方法，其特征在于所述寡肽指2-50个氨基酸的小分子肽。

5.根据权利要求1或2所述的利用RNA环化技术制备寡肽的方法，其特征在于所述寡肽为二肽-1、二肽-2、AP二肽、三肽-1、三肽-5、三肽-8、谷胱甘肽、四肽-5、四肽-7、四肽-9、四肽-11、五肽-4、六肽-2、六肽-3、六肽-8、六肽-9、九肽-1、十肽-4、蓝铜肽、律波肽或胶原蛋白肽。

6.根据权利要求1或2所述的利用RNA环化技术制备寡肽的方法，其特征在于所述蛋白酶选择切割位点为寡肽末端最后一个氨基酸的蛋白酶，用于将融合寡肽切割分离成单独的寡肽。

7.根据权利要求1或2所述的利用RNA环化技术制备寡肽的方法，其特征在于所述蛋白酶为糜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、内肽酶、胶原酶、凝血酶。

8.根据权利要求1或2所述的利用RNA环化技术制备寡肽的方法，其特征在于寡肽编码DNA串联重复排列的数量为5-500个。

9.一种寡肽的表达DNA，其特征在于该表达DNA包括自环化序列1-起始密码子-串联重复的寡肽编码DNA-RBS序列-自环化序列2。

10.根据权利要求9所述的寡肽的表达DNA，其特征在于所述表达DNA包括自环化序列1-起始密码子-亲和标签/分泌标签/自聚集标签-串联重复的寡肽编码DNA-RBS序列-自环化序列2。

11.根据权利要求9或10所述的寡肽的表达DNA，其特征在于所述自环化序列1的序列如SEQ ID No.1所示，所述自环化序列2的序列如SEQ ID No.2所示。

12.根据权利要求11所述的寡肽的表达DNA，其特征在于所述表达DNA为自环化序列1-ATGCATCATCATCATCATCAT-(寡肽编码DNA)_n-GGAGGAGGA-自环化序列2。

13.根据权利要求12所述的寡肽的表达DNA，其特征在于所述n为5-500之间的自然数。

14.根据权利要求11所述的寡肽的表达DNA，其特征在于所述表达DNA为自环化序列1-ATGCATCATCATCATCATCAT-(GGTCACAAA)_n-GGAGGAGGA-自环化序列2。

15.根据权利要求11所述的寡肽的表达DNA，其特征在于所述表达DNA为自环化序列1-ATGCATCATCATCATCATCAT-(CACTTCCGT)_n-GGAGGAGGA-自环化序列2。