[发明专利]一种检测非洲猪瘟的单链抗体、试剂盒及方法

说明书

本申请涉及本申请涉及病毒检测技术领域，尤其涉及一种检测非洲猪瘟的单链抗体、试剂盒及方法；所述单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述试剂盒包括单链抗体和K205R蛋白；通过对针对单链抗体进行设计，由于单链抗体中包括重链可变区和轻链可变区，而针对单链抗体的CDR区中的氨基酸序列能够特异性结合非洲猪瘟的K205R基因所表达出的K205R蛋白，并且结合能力较高，因此该单链抗体在利用间接竞争ELISA技术检测非洲猪瘟阶段，可以准确的结合非洲猪瘟抗原，从而保证检测的准确性，从而在ELISA技术检测的基础上实现更快速、简单、灵敏以及更准确的对非洲猪瘟的检测。

技术领域

本申请涉及病毒检测技术领域，尤其涉及一种检测非洲猪瘟的单链抗体、试剂盒及方法。

背景技术

目前非洲猪瘟(Afican swine fever,ASF)作为外来疫病，尽管ASF不是人畜共患病，不会对人造成危害，但由于没有有效的疫苗，只能通过严格的扑杀进行疫情防控，这给生猪养殖行业带来了强烈的冲击，因此现阶段生猪养殖行业将ASF称为“头号杀手”。由于ASFV基因组具有精密复杂的结构，包含150～167个ORFs，编码蛋白数量达150到200种，但是目前对于蛋白功能的研究大都集中在p72、p54、p30及CD2v等结构蛋白，对其他非结构蛋白的研究较少，因此还有绝大多数蛋白的功能是未知的，仍需要进一步探索其功能。K205R蛋白是一种由ASFV K205R基因编码的功能性非结构蛋白，有研究表明该蛋白在病毒感染宿主之后的4h就已经出现，到6h后该蛋白已经扩散到了细胞质中，因此K205R蛋白是一种主要在早期感染时表达的蛋白，并且在感染过程中该蛋白会持续存在。目前已被证实K205R蛋白可用于ASF的诊断，经K205R蛋白作用下的宿主体内可以产生明显的抗体反应，且与用于免疫的其他靶蛋白对比，K205R蛋白所引起的IgG反应是最为强烈的，同时也只有在该蛋白的刺激下染病的猪只出现了IgM反应。Lokhandwala,S.等人以腺病毒为载体将包括K205R蛋白在内的7种蛋白在佐剂的辅助下采用鸡尾酒疗法免疫商品猪，证实K205R蛋白不仅可以诱导其产生强烈的抗体应答，还可以引起IFN-γ+细胞反应。因此证实了将K205R蛋白作为检测抗原建立ASF抗体检测方法的可行性，对于ASF的早期诊断具有重要的意义。

传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种快速、简单、灵敏的检测方法，包括间接ELISA、阻断ELISA和竞争ELISA等，已被广泛用于检测各种病毒抗体。虽然目前有利用ELISA检测技术对非洲猪瘟的检测，但是存在检测结果不准确的情况，因此如何提供一种检测非洲猪瘟的单链抗体，以实现更快速、简单、灵敏以及更准确的对非洲猪瘟的检测。

发明内容

本申请提供了一种检测非洲猪瘟的单链抗体、试剂盒及方法，以解决现有技术中通过ELISA检测技术难以对非洲猪瘟进行准确的检测。

第一方面，本申请提供了一种检测非洲猪瘟的单链抗体，所述单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

可选的，所述单链抗体由组装scFv基因所表达，所述组装scFv基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

第二方面，本申请提供了一种制备第一方面所述的单链抗体的方法，所述方法包括：

以第一预设扩增引物组对K205R基因进行扩增，并对扩增产物进行重组表达载体的构建，后进行K205R蛋白的诱导表达和纯化，得到K205R蛋白；

采用所述K205R蛋白进行器官的免疫，后进行RNA提取，并进行反转录，得到cDNA片段；

采用第二预设引物组对所述cDNA片段进行扩增，后以第三预设引物组进行组装，得到scFv基因；

连接噬菌粒与所述scFv基因，得到重组载体；

向感受态细胞中转入所述重组载体，后进行亲和性淘选，得到多个特异性单链抗体；