[发明专利]7α-羟基类固醇脱氢酶突变体及其在7-氧代-石胆酸合成中的应用在审
| 申请号： | 202211637423.5 | 申请日： | 2022-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN116200352A | 公开（公告）日： | 2023-06-02 |
| 发明（设计）人： | 张荣珍;柳志永 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P33/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 赵巧娜 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 羟基 类固醇 脱氢酶 突变体 及其 胆酸 合成 中的 应用 | ||
1.一种7α-羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于，所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体为将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的7α-羟基类固醇脱氢酶的氨基酸序列的第262位赖氨酸突变为苏氨酸得到的；
或，所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体为将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的7α-羟基类固醇脱氢酶的氨基酸序列的第301位谷氨酰胺突变为异亮氨酸得到的；
或，所述7α-羟基类固醇脱氢酶突变体为将氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的7α-羟基类固醇脱氢酶的氨基酸序列的第258位异亮氨酸突变为甲硫氨酸，同时将氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的7α-羟基类固醇脱氢酶的氨基酸序列的第262位赖氨酸突变为苏氨酸得到的。
2.编码权利要求1所述突变体的基因。
3.携带权利要求2所述基因的重组载体。
4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体是以pET-21a、pET-21a或pRSFDuet-1为表达载体。
5.表达权利要求1所述的突变体、或携带权利要求2所述的基因、或携带权利要求3或4所述的重组载体的重组细胞。
6.根据权利要求5所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞以细菌或真菌为表达宿主。
7.一种用于催化鹅去氧胆酸合成7-氧代-石胆酸的催化剂，其特征在于，所述催化剂为权利要求1所述的7α-羟基类固醇脱氢酶突变体，或采用权利要求5或6所述重组细胞制备得到的含有7α-羟基类固醇脱氢酶突变体的酶液或其冻干粉。
8.一种合成7-氧代-石胆酸的方法，其特征在于，所述方法为，将权利要求1所述的突变体，或采用权利要求5或6所述重组细胞制备得到的突变体添加至含有底物鹅去氧胆酸、辅酶NAD+的反应体系中，催化制备得到7-氧代-石胆酸。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述反应体系中还含有pH 8.0～9.5的缓冲盐溶液；所述底物鹅去氧胆酸的浓度为2～50mM，反应温度为20～40℃。
10.权利要求1所述的突变体、或权利要求2所述的基因、或权利要求3或4所述的重组载体、或权利要求5或6所述的重组细胞在制备7-氧代-石胆酸或含有7-氧代-石胆酸的产品中的应用。
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