[发明专利]一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法

说明书

本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法。本发明以Cu₂O八面体为模板及铈离子为供体，四(4‑羧基苯基)卟啉(TCPP)为配体，制备Cu₂O‑Ce‑TCPP纳米材料，Cu₂O‑Ce‑TCPP表现类漆酶纳米酶活性，亚硝酸盐提高了Cu₂O‑Ce‑TCPP催化4‑氨基安替比林（4‑AP）和邻氯酚（2,4‑DP）偶联显色氧化反应，而喹诺酮加入抑制了上述反应，基于喹诺酮浓度与吸光度呈线性关系，建立高灵敏、选择性强喹诺酮检测新方法，检出限为0.2μg/kg。将本方法应用于食品中喹诺酮药物残留的检测分析，结果与相关标准方法测定相符。方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

技术领域

本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法。

背景技术

喹诺酮类药物以其抗菌谱广、吸收好、价格低廉等特点，被广泛应用在畜、禽养殖业，这类抗生素具有新型高效广谱低毒的特点，抗菌效果好，但是由于这类药物的半衰期较长，所以当用药量过大时便会在动物体内有部分残留，给人们身体健康带来了极大的危害。目前，测定方法多为高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、酶联免疫法等。

纳米酶是指具有天然酶催化活性的纳米材料，其成本低、易储存、酶活性可调节控制。其中，漆酶是一种以铜离子为催化中心的多酚氧化酶，它可以通过电子的转移来催化多种酚类和酚胺类底物氧化并产生无害的水，独特的环保特性使其在纳米酶的研究中备受瞩目。近年来纳米酶包括漆酶模拟酶已在食品分析、生物传感、医学诊断和工业生产中得到广泛的应用。现有报道将拟过氧化酶纳米酶用于喹诺酮类药物的测定，而基于模拟漆酶纳米酶测定喹诺酮类药物，现并未有相关报道，由于漆酶通过电子的转移来催化酚类和酚胺类底物，氧化底物及氧化能力有限，干扰大大降低。

本发明以Cu₂O八面体为模板及铈离子为供体，四(4-羧基苯基)卟啉(TCPP)为配体，制备Cu₂O-Ce-TCPP纳米材料，Cu₂O-Ce-TCPP表现类漆酶纳米酶活性，亚硝酸盐提高了Cu₂O-Ce-TCPP催化4-氨基安替比林（4-AP）和邻氯酚（2,4-DP）偶联显色氧化反应，而喹诺酮加入抑制了上述反应，基于喹诺酮浓度与吸光度呈线性关系，建立高灵敏、选择性强喹诺酮检测新方法，检出限为0.2 μg/kg。将本方法应用于食品中氟喹诺酮药物残留的检测分析，结果与相关标准方法测定相符。方法具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种拟漆酶结合亚硝酸盐的加速氧化作用检测喹诺酮类药的方法，利用喹诺酮类药抑制亚硝酸盐加速4-氨基安替比林（4-AP）和邻氯酚（2,4-DP）偶联显色氧化反应，建立喹诺酮类药检测新方法。

一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法，包括以下步骤：

（1）在氧氟沙星标准溶液中加入Cu₂O/Ce-TCPP纳米酶、2,4-二氯苯酚(2,4-DP)、4-氨基安替比林(4-AP)及亚硝酸盐溶液，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，制得的氧氟沙星溶液浓度范围在0.66-100μg/L，摇匀，静置5-10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，建立吸光度与氧氟沙星浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；

（2）提取净化检测样品中喹诺酮，获得样品测定液，在样品测定液中加入Cu₂O/Ce-TCPP纳米酶、2,4-DP、4-AP及亚硝酸盐溶液，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，摇匀，静置5-10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（1）回归方程中，获得样品中喹诺酮含量。

所述Cu₂O/Ce-TCPP纳米酶制备如下：