[发明专利]一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法

权利要求书

1.一种基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法，包括以下步骤：

（1）在氧氟沙星标准溶液中加入Cu₂O/Ce-TCPP纳米酶、2,4-二氯苯酚(2,4-DP)、4-氨基安替比林(4-AP)及亚硝酸盐溶液，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，制得的氧氟沙星溶液浓度范围在0.66-100μg/L，摇匀，静置5-10 min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，建立吸光度与氧氟沙星浓度的定量关系，绘制标准曲线，得到回归方程；

（2）提取净化检测样品中喹诺酮，获得样品测定液，在样品测定液中加入Cu₂O/Ce-TCPP纳米酶、2,4-DP、4-AP及亚硝酸盐溶液，并用pH 6.2 MES 缓冲溶液定容，摇匀，静置5-10min，离心，取上清液置于506 nm波长处测定吸光度，吸光度代入步骤（1）回归方程中，获得样品中喹诺酮含量；

所述Cu₂O/Ce-TCPP纳米酶制备如下：

Cu₂O的制备：在2mol/L 10 -15 mL的NaOH溶液中加入0.01 mol/L 100-120 mLCuCl₂，5-10g聚乙烯基吡咯烷酮（PVP），室温搅拌30-40 min，然后加入0.6mol/L 5 -10 mL抗坏血酸，在55℃水浴中搅拌5-6 h，用去离子水洗涤2-3次，真空干燥，即得；

② Cu₂O/Ce-TCPP的制备：取上述制备的Cu₂O颗粒30-35mg，加入0.1 mol/L 20-25 mLCe(NO₃)₃ 的DMF溶液，超声处理20-30 min，加入到0.02gTCPP溶解在DMF溶液10mL中，120 ℃搅拌6-8 h，离心，用乙醇和去离子水交替洗涤2-3次，真空干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法，其特征在于：所述的样品测定液制备如下：

动物组织样品：称取均质试样1.0g（精确至0.1g），置于10mL离心管中，加入5mL0.1mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液，涡旋混合1min，超声提取10-15min，离心，提取3次，合并上清液，向上清液中少量2-3次加入20mL正庚烷，振荡，使脂溶性物质溶于正庚烷，弃去上层烷层除脂；

将下层清液减压挥干溶剂，之后用水溶至容量瓶中，得样品液；

牛奶和鸡蛋样品：称取1.00mL均质试样，加入1:4 (V/V) 的乙酸盐缓冲液-乙腈混合溶液10.00mL，涡旋混合1min，离心，除去蛋白质；

向上清液中少量2-3次加入20mL正庚烷，振荡，使脂溶性物质溶于正庚烷，弃去上层烷层除脂；

将下层清液减压挥干溶剂，之后用水溶至容量瓶中，得样品液。

3.根据权利要求1所述的基于模拟漆酶纳米酶快速检测食品中喹诺酮药物残留的方法，其特征在于：100µg/mL Cu₂O/Ce-TCPP纳米酶添加量为50~100µL，1mg/mL 2,4-DP添加量为100-150 µL，1mg/mL 4-AP添加量为100-150 µL，200 μg/mL 亚硝酸盐溶液添加量为50-100 µL，离心条件为离心时间5-10 min，离心速率1000-3000 r/min。