[发明专利]一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒

说明书

本发明公开的属于基因检测试剂盒技术领域，具体为一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒，包括同时检测DPYD*2A、DPYD*13、DPYD2846AT和TP53位点基因多态性的试剂盒，所述试剂盒包括：反应体系A，所述反应体系A包括DPYD*2A的上下游引物、DPYD*2A野生型和突变型探针、DPYD*13的上下游引物、DPYD*13野生型和突变型探针、Taq酶、PCR缓冲液、dNTP、Mg2+和去离子水，本发明使用PCR‑荧光探针法，能够仅通过两个反应体系实现对DPYD*2A、DPYD*13、DPYD 2846AT和TP53四个位点的基因多态性检测，操作简单、检测时间短、成本低，具有较高的特异性和敏感性，且闭管操作，无需后续处理，可最大限度避免产生气溶胶污染导致的假阳性，为肿瘤患者的氟尿嘧啶类化疗药物的用药指导提供了重要参考。

技术领域

本发明涉及基因检测试剂盒技术领域，具体为一种氟尿嘧啶类抗肿瘤药物用药指导的基因检测试剂盒。

背景技术

根据世界卫生组织(WHO)统计数据，全世界约有60％的人死于癌症、糖尿病、心血管疾病、慢性呼吸系统疾病这4大类疾病，而癌症则是最主要的死因之一。2008年全球死于癌症的患者达760万人，占全球死亡人数的13％，我国卫生部第三次全国死因调查结果也显示，癌症已成为我国仅次于心脑血管疾病的第二大死亡原因，占死亡总数的22.32％，并成为我国城市的首位死因。

目前，恶性肿瘤逐年升高的发病率及其巨大的医疗费用等因素，使得大家“谈癌色变”。好在治疗手段发展快速，包括手术、放疗、化疗、生物治疗等。其中，化疗是肿瘤治疗的主要手段，但是半数以上的患者经过化疗后常常疗效不大，同样的肿瘤药物对于不同病人的疗效往往会有很大的差异；同时化疗药物毒副作用较大，其在杀伤肿瘤细胞的同时，又杀伤正常组织的细胞，有时还可出现并发症，许多患者因为化疗的强烈毒副作用而备受折磨，甚至死亡。大量临床研究证实，单凭经验治疗肿瘤，一般只有30％以下的疗效，且毒副作用明显。药物遗传学和药物基因组学的研究表明，不同病人基因表达水平的差异导致对各种抗肿瘤药物的疗效差异，故肿瘤临床治疗需要制定个体化的精准方案。而基因检测是评估患者使用药物效果非常重要的一环，能从分子层面给医生用药予精确的指导。

抗肿瘤氟尿嘧啶类药物(fluorouracil，5-FU)是包括5-FU及可供口服的前药卡培他滨和替加氟等药物在内的一类重要的抗代谢类药物。氟尿嘧啶是临床上应用最广的抗肿瘤药物之一，通过防止嘧啶类核苷酸的形成而干扰DNA的合成来杀伤癌细胞，临床上主要用于治疗乳腺癌、消化道癌、卵巢癌和原发性支气管肺腺癌等。但是，5-FU类药物导致的腹泻、口腔黏膜炎、骨髓抑制、手足综合征和心脏毒性等常限制其在某些患者中的使用，其总体有效率也不尽如人意。

DPD(dihydropyrimidine dehydrogenase，二氢嘧啶脱氢酶)是5-FU代谢的起始酶和限速酶，DPD缺乏会导致5-FU用药后的严重毒性。DPYD编码DPD，定位于人类染色体1p22，包括23个基因，长950kb。DPYD的多态性可能导致DPD的结构及活性的变化，并影响5-FU在体内的代谢。较明确的与DPD缺陷相关的突变有*2A、*13和2846AT等。FDA提供的说明书中明确：存在DPD活性部分或完全缺乏的患者，无法充分分解氟嘧啶类药物，发生严重甚至致命毒性的风险增加(包括严重黏膜炎、腹泻、中性粒细胞减少和神经毒性等)。DPYD基因型检测对指导肿瘤的化疗、预测以5-FU为基础的化疗方案的疗效和毒性具有较高的临床价值。