[发明专利]一种环己烯甲酸酯水解酶突变体及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 202211614184.1 | 申请日： | 2022-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN115772510A | 公开（公告）日： | 2023-03-10 |
| 发明（设计）人： | 刘阳;倪文娟;秦小飞;周西朋;龚彦春;刘永强 | 申请（专利权）人： | 南京威凯尔生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N15/55;C12N15/10;C12N15/11;C12P41/00;C12P7/02 |
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| 地址： | 210061 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 己烯 甲酸 水解 突变体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种环己烯甲酸酯水解酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如序列号 (ID): 4所示。
2.根据权利要求1所述的环己烯甲酸酯水解酶突变体，其特征在于，所述的环己烯甲酸酯水解酶突变体是将序列号 (ID): 2所示氨基酸序列的第253位天门冬氨酸残基替换为缬氨酸残基后形成的新氨基酸序列的蛋白质。
3.一种编码权利要求1或2所述的环己烯甲酸酯水解酶突变体的基因，其特征在于，其核苷酸序列如序列号 (ID): 3所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求3所述的编码基因。
5.一种权利要求1或2所述的环己烯甲酸酯水解酶突变体的制备方法，其特征在于，突变体由定点饱和突变得到，
所述定点饱和突变的上游引物为：CTGACCGGCGCTNNKGTTGATTACGTT；
下游引物为：AACGTAATCAACMNNAGCGCCGGTCAG。
6.一种权利要求1或2所述的环己烯甲酸酯水解酶突变体在催化3-环己烯-1-甲酸酯制备光学活性(S)-3-环己烯-1-甲酸中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述3-环己烯-1-甲酸酯的结构式如下所示：
，其中R选自甲基、乙基、异丙基或丁基。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的应用是采用环己烯甲酸酯水解酶突变体在缓冲液中将3-环己烯-1-甲酸酯消旋体中的(R)-3-环己烯-1-甲酸酯水解，得到(S)-3-环己烯-1-甲酸酯，然后在碱性条件下水解得到(S)-3-环己烯-1-甲酸。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述缓冲液选自柠檬酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液；所述缓冲液pH为5～9。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，反应温度为15～30℃。
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