[发明专利]一种同时检测CPV、CDV和CHV抗体的液相芯片试剂盒及方法

说明书

本发明提供一种同时检测CPV、CDV和CHV抗体的液相芯片试剂盒，包括偶联磁珠组、检测抗体和报告分子；所述的偶联磁珠组分别由检测犬细小病毒的磁珠CPV‑35、检测犬瘟病毒的磁珠CDV‑45，检测犬疱疹病毒的磁珠CHV‑43组成；本发明仅需少量样本即可同时定性、定量检测同一样本中的多种不同目的分子，即多重检测。可以满足宠物疫病监测的要求，可极大提高宠物疫病检测的效率，缩短检测周期，减少成本，具有巨大市场应用前景。本发明建立的三种免疫磁珠(偶联磁珠)，既可多种选择性地组合使用又可单独使用，充分满足了市场监测的不同需求。

技术领域

本发明涉及宠物病毒病检测技术领域，尤其是一种同时检测CPV、CDV和CHV抗体的液相芯片试剂盒及方法。

背景技术

犬细小病毒病(Canine parvovirus disease)是由犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)引起的犬的一种急性传染病，该病在临床上主要表现为发热、呕吐、出血性肠炎、白细胞减少和幼犬心肌炎。目前免疫接种是防治该病的主要措施。犬瘟热是由犬瘟热病毒(Canine Distemper virus,CDV)感染引起的急性、高度接触性传染疾病，以双向热型、结膜炎、肺炎、肠炎和神经症状为临床症状，死亡率高。由于高水平母源抗体的干扰或疫苗抗原性差异，往往导致免疫失败而引起犬瘟热的发生。犬疱疹病毒病毒病是由犬疱疹病毒(Canineherpesvirus,CHV)感染引起的新生幼犬致死性感染的一种疾病。21日龄以上的幼犬主要表现为上呼吸道症状，流鼻涕、咳嗽和打喷嚏等；同时可造成母犬不孕、流产和死胎以及公犬的阴茎炎和包皮炎。

近年来，由于疫苗抗原性差异，幼犬母源抗体干扰，免疫犬抗体水平过低导致免疫失败，引发CPV和CDV感染的报道不断出现。因此及时了解幼犬CPV、CDV母源抗体水平和免疫犬抗体水平，确定最佳的疫苗免疫时机，对于CPV和CDV的防控具有重要意义。

通过检测母源抗体及接种后抗体的水平，确定其是否达到预期的保护性抗体滴度，从而确定疫苗的最适接种时间。目前能够检测犬血清抗体水平的技术主要有血清中和试验、酶联免疫吸附试验、血凝抑制试验等方法。血清中和试验是检测血清中和抗体的标准方法，也常用来评价疫苗免疫效果的好坏。虽然血清中和试验灵敏特异，但花费时间较长。另外对试验操作人员要求水平较高，需要熟练掌握细胞接毒后细胞的病变现象，不利于快速检测血清抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)是免疫学检测技术中广泛应用于血清抗体检测的一项技术，它是将抗原或者抗体吸附在固相载体上，借助于抗原-抗体反应实现检测目的。但由于ELISA方法检测成本高以及需要特殊的仪器，需专业技术人员操作，导致这些检测只能局限于实验室或相应的宠物诊疗机构。血凝抑制试验(HI)被广泛用于定量检测CPV特异性抗体，是CPV抗体检测的金标准。但HI检测结果容易受检测者主观影响，且检测需要猪新鲜的红细胞和完整且大量的病毒粒子，在操作时容易受一些非特异性抑制剂的影响。

这些方法有一个共同的缺点：一次试验只能检测一种病原抗体水平，无法通过灵活地组合实现对多种病原抗体高通量、多通道的高效检测。因此这些技术方法都不适用于动物群体性疾病的实时检测。液相芯片是一种新型生物芯片技术平台，具有操作简便，敏感性强，灵活多变、检测范围广等显著特点，其最大的优势是可以同时对同一血清样品中多种病原抗体进行定性分析，实现多种病原抗体的实时监测。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种同时检测CPV、CDV和CHV抗体的液相芯片试剂盒及方法，本发明能够满足快速、准确、高通量的宠物疫病抗体监测要求。

本发明的技术方案为：一种同时检测CPV、CDV和CHV抗体的液相芯片试剂盒，包括偶联磁珠组、检测抗体和报告分子；

所述的偶联磁珠组分别由检测犬细小病毒的磁珠CPV-35、检测犬瘟病毒的磁珠CDV-45，检测犬疱疹病毒的磁珠CHV-43组成；

所述的磁珠CPV-35是CPV VP1重组蛋白与第35号磁珠偶联获得；