[发明专利]一种针对人TNFα分子的类风湿关节炎治疗性疫苗的构建

说明书

本发明涉及一种针对人肿瘤坏死因子α(TNF­α)的类风湿关节炎治疗性疫苗的构建。具体地，本发明通过异型双功能试剂4‑(N‑马来酰亚胺甲基)环己烷‑1‑羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐(sulfo‑SMCC)和N‑琥珀酰亚胺S‑乙酰硫代丙酸盐(SATP)交联抗原hTNFα与载体蛋白重组CRM197，构建hTNF‑CRM197偶联物，偶联物纯化后，制备得到hTNF‑CRM197结合疫苗。该结合疫苗与佐剂联用，可诱导表达人TNF­α的转基因小鼠产生高滴度的hTNF­α中和抗体，并能显著缓解转基因小鼠的关节炎症状，可用于治疗类风湿关节炎。

技术领域

本发明属于生物和医药领域，具体地涉及一种针对人肿瘤坏死因子α (TNFα)的类风湿关节炎治疗性质疫苗的构建方法和用途。

背景技术

类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis，RA)是一种严重的慢性全身性自身免疫性疾病，主要侵犯全身各处关节，呈多发性和对称性慢性增生性滑膜炎，由此引起关节软骨和关节囊的破坏，最后导致关节强直畸形，是继心血管疾病和癌症后的一种常见性慢性疾病。

该病在我国发病率高达0.36%，致残率15%，我国约有500万人患类风湿关节炎患者，还在呈上升趋势，并呈现年龄多层次、病种多样化趋势，因其发病率高、致残率高，对人类的健康危害极大，被喻为“不死的癌症”。RA作为一种自身免疫性疾病，其发病机制尚未完全明确，研究结果显示该病的发病机制与多种因素相关，包括遗传因素、环境因素及体内免疫状态等。研究发现RA的发生发展过程中机体免疫系统中的炎性细胞因子也发挥了重要的作用，如TNFα、IL-1、IL-15、IL-6等。抑制炎性细胞因子的产生或阻断其作用，有望改善RA发生发展过程中的炎性反应，进而延缓RA的疾病进展。

在诸多RA相关的炎性细胞因子中，肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factoralpha, TNFα)是最重要的炎性细胞因子之一。阻断TNFα作用已成为RA治疗领域的重要治疗手段。

目前已有三种TNFα拮抗剂成功上市，分别为Adalimumab（商品名Humira）、Infliximab（商品名Remicade）和Etanercept（商品名Enbrel），多项临床研究均已证实，这三种TNFα拮抗剂均可减轻RA关节的炎症反应，并可改善关节功能以及延缓病情的进展。这三种已上市的TNFα拮抗剂中，Adalimumab已经多年蝉联全球药物销售冠军，2019年销售额接近200亿美元，Infliximab与Etanercept也常年占据销售榜前20的位置。这些数据从另一个侧面反映了以TNFα为靶点的治疗策略具有巨大的市场及对RA具有良好的疗效。

然而，尽管TNFα拮抗剂治疗RA已取得了令人瞩目的成果，但昂贵的治疗费用和长期使用，对患者及其家庭造成了严重的经济负担，相当多的患者最终因不能支付高昂费用而停止治疗。针对目前RA的治疗现状，研发一种新型的、长效的并能拮抗TNFα炎性因子的RA治疗性疫苗可能是解决这一问题的有效方法。该RA治疗性疫苗能诱导机体不断产生相应抗体，中和RA发生、发展中分泌的炎性细胞因子，延缓RA患者的病情进展，进而改善其临床症状。针对TNFα靶点开发一种新型的疫苗研发思路已成为RA治疗领域的研究热点。NEOVACS公司研究开发的TNFα-kinoid是一种以TNFα为靶点的RA治疗性疫苗。TNFα-kinoid是重组人肿瘤坏死因子与血蓝蛋白载体(Keyhole Limpet Hemocyanin, KLH)结合形成的复合物。但在该公司开展的II期临床试验中，接受疫苗治疗的患者与对照组的临床疗效未出现显著性差异，患者未能诱导产生针对hTNFα的中和抗体。因此，如何提高疫苗的免疫原性，突破人体对TNFα的免疫耐受，是以TNFα为靶点的RA治疗性疫苗继续解决的问题。

因此，本领域迫切需要开发出一种具有高免疫原性，并且能够突破人体对TNFα的免疫耐受的RA治疗性疫苗。

发明内容