[发明专利]大刺鳅性别鉴定的特异性DNA片段、遗传性别标记引物及应用

说明书

本发明公开了一种大刺鳅性别鉴定的特异性DNA片段、遗传性别标记引物及应用；特异性DNA片段分别为下列之一：Contig‑1上游引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；Contig‑1下游引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；Contig‑2上游引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；Contig‑2下游引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；大刺鳅性别鉴定的遗传性别标记引物，其为引物对1，包括Contig‑1上游引物和Contig‑1下游引物。将该特异性DNA片段及遗传性别标记引物应用于大刺鳅全雄性育种。本发明适用范围广、耗时短，检测结果准确。

技术领域

本发明属于生物遗传基因和鱼类性别鉴定技术，具体涉及一种大刺鳅性别鉴定的特异性DNA片段、遗传性别标记引物及应用。

背景技术

近年来，随着测序技术的发展日益趋于成熟，目前许多动物的性别标记开发已经被广泛应用于尼罗罗非鱼（ Oreochromis niloticus）、半滑舌鳎（ Cynoglossussemilaevis）、虹鳟（ Oncorhynchus mykiss）等。但是这些分子标记开发主要是通过随机扩增多态DNA（ Random amplified polymorphic DNA, RAPD）、微卫星标记（ Simple sequence repeat, SSR）、单核苷酸多态性（ Single nucleotide polymorphic, SNP）等技术获得，这些遗传性别分子标记的开发具有价格昂贵、工作量大的特点。而重测序技术为遗传性别标记的开发提供了一种高效手段，目前通过重测序技术方法已成功开发出应用于大刺鳅遗传性别鉴定的特异性分子标记。

大刺鳅（ Mastacembelus armatus）隶属于合鳃目（ Symbranchiformes）刺鳅科（ Mastacembelidae）刺鳅属（ Mastacembelus）的一种淡水鱼类，俗称角罗鳅、刀鳅等，主要分布在东南亚多国以及我国广东、广西、福建、海南等地，并且大刺鳅营养丰富、肉质极佳、深受消费者喜爱。大刺鳅的生长过程呈现性别二态性，同龄的商品鱼中，雄鱼的体重比雌鱼的体重重20％以上，因此大刺鳅的全雄单性育种具有更高的经济价值。

中国发明申请号 202010057366.8的文献公开了大刺鳅性别鉴定的特异性DNA片段及应用，本发明在2b-RAD-seq技术的基础上，并利用基因组步移技术，开发了大刺鳅雄性性别特异性标记，所述的特异性DNA片段为SEQID NO .1或SEQ ID NO .2所示，针对该特异性序列，可以利用常规PCR扩增和普通琼脂糖电泳对大刺鳅的性别进行鉴定，其用于大刺鳅性别鉴定的引物为：CTACACAGGCAATACTTGGCAAATGAATAC和ATCAGTCATCTGTGCCTGGGATATATG。但是，该文献提供的技术方案还存在着如下不足：首先，其采用的测序方法只能为2b-RAD-seq，适用群体为养殖家系F1子代群体，标记条带判断依据为：雌性：无条带，雄性：431bp/746bp；仅能对雄性进行准确的判定，而不能对雌性、雄性两性进行准确的判断，也不能对更为广泛的野生群体和养殖群体进行准确的判断，因此难以将其应用于大刺鳅的大范围群体性别鉴定和育种。