[发明专利]大刺鳅性别鉴定的特异性DNA片段、遗传性别标记引物及应用

权利要求书

1.一种大刺鳅性别鉴定的遗传性别标记引物，其特征在于，该遗传性别标记引物为引物对1，其包括Contig-1上游引物和Contig-1下游引物；

所述引物对1的从5’-3’的核苷酸序列如下：

Contig-1上游引物：5’-CCATTCAGCATTACACCATACA-3’；

Contig-1下游引物：5’-TTCCCCTACCAAATCACCA-3’。

2.一种大刺鳅性别鉴定的遗传性别标记引物，其特征在于，该遗传性别标记引物为引物对2，其包括Contig-2上游引物和Contig-2下游引物；

所述引物对2的从5’-3’的核苷酸序列如下：

Contig-2上游引物：5’-TGCTACTGTCCAAAGTAAACAGG-3’;

Contig-2下游引物：5’-CGGGCAGAATCACTCAAA-3’。

3.一种采用权利要求1或2任一项所述遗传性别标记引物进行大刺鳅性别鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：设计引物对1或引物对2；

S2：大刺鳅DNA样品制备；

S3：以上述步骤S2获得的DNA样品作为模板，采用步骤S1设计获得的引物对1或引物对2进行PCR扩增，通过凝胶电泳进行检测，若电泳结果显示具有一条DNA特异性条带，此时所检测的大刺鳅为雌性大刺鳅；若电泳结果显示具有两条DNA特异性条带，此时所检测的大刺鳅为雄性大刺鳅。

4.根据权利要求3所述遗传性别标记引物进行大刺鳅性别鉴定的方法，其特征在于，

所述步骤S2中的DNA样品制备，是采用DNA提取试剂盒进行大刺鳅DNA的提取。

5.根据权利要求3所述遗传性别标记引物进行大刺鳅性别鉴定的方法，其特征在于，

所述步骤S3中采用引物对1或者引物对2进行PCR扩增时，采用的25μL的PCR反应体系中包括：大刺鳅DNA样品100ng，Contig-1或者Contig-2的上下游引物各1μL，2×TaqMasterMix 12.5μL，加ddH₂O至25μL体系。

6.根据权利要求3所述遗传性别标记引物进行大刺鳅性别鉴定的方法，其特征在于，

所述的步骤S3中采用引物对进行PCR扩增时，PCR反应程序为：首先 95℃预变性3min；再95℃变性15s，58℃退火15s，72℃延伸1min，共20个循环；再95℃变性15s，50℃退火15s，72℃延伸1min，共15个循环；再72℃最终延伸5min；

所述的步骤S3在进行电泳检测鉴定时，采用质量百分含量为1.2％的琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段条带数以及长度。

7.根据权利要求3所述遗传性别标记引物进行大刺鳅性别鉴定的方法，其特征在于，

所述步骤S3电泳检测结果中，扩增出的特异性条带为一条时大刺鳅为雌性，特异性条带为两条时大刺鳅为雄性；引物对1的X染色体上产物的特异性条带长度为354bp，Y染色体上产物的特异性条带长度为473bp；引物对2的X染色体上产物的特异性条带长度为649bp，Y染色体上产物的特异性条带长度为491bp。

8.一种权利要求1或2任一项所述大刺鳅遗传性别标记引物在大刺鳅全雄性育种中的应用。