[发明专利]一种同时测定口服五维盐酸赖氨酸葡萄糖中多种成分含量的方法

权利要求书

1.一种同时测定口服五维盐酸赖氨酸葡萄糖中多种成分含量的方法，其特征在于，采用HPLC-多波长法同时对口服五维盐酸赖氨酸葡萄糖中的盐酸赖氨酸、泛酸钙、维生素B1、维生素B2、烟酰胺、香草醛、维生素B6以及10-羟基-2-葵烯酸8种成分的含量进行测定，具体包括如下步骤：

（1）色谱条件：以Alltima-C18，250 mm ×4.6 mm，5 μm为色谱柱，以用20%磷酸溶液调节pH值为2.5的5mmol/L庚烷磺酸钠溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1ml/min，柱温为40℃，检测波长：盐酸赖氨酸、泛酸钙200nm，10-HDA211nm，维生素B1、维生素B2、烟酰胺、香草醛261nm，维生素B6290nm，进样量为20 μL；

（2）对照品溶液的制备：

①各对照品储备液（1）：精密称取盐酸赖氨酸对照品52.26mg、烟酰胺对照品10.56mg、香草醛对照品18.93mg、10-HDA对照品17.82mg置于同一50ml容量瓶中，加入0.1%磷酸溶液约30ml，超声并同时振摇使溶解，待用；

②各对照品储备液（2）：精密称取维生素B1对照品10.70mg、维生素B6对照品13.03mg、泛酸钙对照品10.11mg分别置于10ml容量瓶中，加入0.1%磷酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；维生素B2对照品10.89mg置于20ml量瓶中，加入水5ml，磷酸1ml，水浴加热振摇使溶解，取出，冷至室温，用水稀释至刻度，摇匀，即得；

③混合对照品储备液：分别精密量取维生素B1、维生素B6、泛酸钙、维生素B2对照品储备液各4、1、3、2ml同置于①项下对照品储备液（1）的50ml量瓶中，用0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得；

④混合对照品溶液的制备：精密量取③项下的混合对照品储备液2ml置于10ml量瓶中，用0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得；

（3）供试品溶液的制备：取本品10包的内容物，混匀，研细，称取2g，精密称定，置于10ml量瓶中，加入0.1%磷酸溶液6ml，超声并振摇使溶解，冷至室温，用0.1%磷酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即可得到；若供试液含全脂乳粉，需要先以9000rpm、0℃冷冻离心10 min后，取上清液趁冷用滤膜滤过，取续滤液，即得；

（4）测定：分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，照上述的色谱条件进行测定，记录色谱图、峰面积值，以峰面积计算样品中盐酸赖氨酸、泛酸钙、维生素B1、维生素B2、烟酰胺、香草醛、维生素B6以及10-羟基-2-葵烯酸8种成分的含量。

2.根据权利要求1所述的同时测定口服五维盐酸赖氨酸葡萄糖中多种成分含量的方法，其特征在于，所述的步骤（1）色谱条件中，进行梯度洗脱的梯度洗脱程序为：0～45min，流动相A的体积百分比为95％～77％，流动相B的体积百分比为5％～23％；45～57min，流动相A的体积百分比为77％，流动相B的体积百分比为23％；57～58min，流动相A的体积百分比为77％～95％，流动相B的体积百分比为23％～5％；58～65min，流动相A的体积百分比为695％，流动相B的体积百分比为5％。