[发明专利]一种抗菌肽WRKB7及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗菌肽WRKB7及其制备方法和应用，属于抗菌肽技术领域，所述抗菌肽WRKB7的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明的抗菌肽WRKB7不仅具有显著的抗菌活性，还具有抗氧化功能。此外，本发明的抗菌肽WRKB7稳定性好，副作用低。

技术领域

本发明属于抗菌肽技术领域，具体涉及一种抗菌肽WRKB7及其制备方法和应用。

背景技术

抗菌肽(antibacterial peptides，ABPs)，又称抗微生物肽，原指昆虫体内经诱导而产生的一类分子质量在4kD左右的具有抗菌活性的碱性多肽物质。是由瑞典科学家Boman于1972年在惜古比天蚕(Hyalophora cecropia)首次发现的，并将其命名为天蚕素(cecropins)。此后科学家相继从多种生物体中分离出具有广谱抗菌、抗微生物活性的多肽，因此抗菌肽的概念得到扩展，它是指存在于生物体内的具有抗菌活性的多肽。现有发现AMPs除具有抗病毒、抗细菌和抗真菌等功能外，某些AMPs还有较强的抗氧化功能及清除自由基的作用。但是，目前报道的具有抗氧化作用的抗菌肽的种类较少。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗菌肽WRKB7及其制备方法和应用，抗菌肽WRKB7还具有抗氧化作用。

本发明提供了一种抗菌肽WRKB7，所述抗菌肽WRKB7的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供了上述方案所述抗菌肽WRKB7的制备方法，包括以下步骤：根据SEQID No.1所示氨基酸序列使用固相合成法合成粗多肽。

优选的，在合成粗多肽后，还包括对所述粗多肽进行纯化；所述纯化包括高效液相色谱纯化。

优选的，所述高效液相色谱纯化包括：将所述粗多肽溶于体积浓度为0.1％的三氟醋酸水溶液中，得到待测样品，待测样品上样，采用二元流动相进行梯度洗脱，于25℃条件下检测波长215nm；

所述二元流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A为体积浓度为0.1％的三氟醋酸水溶液；所述流动相B为体积浓度为0.1％的三氟醋酸乙腈溶液；

所述梯度洗脱的程序为：在30min内，流动相B在洗脱剂中的含量从0％～80％按线性关系增长；

所述梯度洗脱的洗脱剂流速为1mL/min；

所述高效液相色谱纯化的色谱柱为硅胶烷基键合相C18柱。

优选的，在对所述粗多肽进行纯化后，还包括测定纯化后的多肽的分子量和等电点。

优选的，所述测定纯化后的多肽的分子量包括使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定纯化后的多肽的分子量；

所述使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定纯化后的多肽的分子量包括：

将纯化后的多肽溶于去离子水中，得到纯化多肽溶液；

将所述纯化多肽溶液和饱和基质溶液混合，得到待测样本；

使用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定所述待测样本的分子量；

所述纯化多肽溶液中纯化多肽的浓度为1μmol/mL；

所述纯化多肽溶液和饱和基质溶液的体积比为1:1；

所述饱和基质溶液的制备方法包括：

将α-氰基-4-羟基肉桂酸溶于乙腈溶液中，制成饱和溶液，离心，取上清液，得到饱和基质溶液；

所述乙腈溶液以体积浓度为50％的乙腈水溶液为溶剂，含有体积浓度为0.1％三氟醋酸。