[发明专利]基于胚状体途径的辣椒花药培养新方法及植株的倍性鉴定

说明书

本发明提供了一种基于胚状体途径的辣椒花药培养新方法，包括如下步骤：取杂交一代辣椒品种，在盛花期选取单核靠边期的花蕾，装入自封袋中；花蕾消毒；将花蕾置于无菌滤纸上，吸干表面水分后剥开花蕾，取花药；将花药接种于装有诱导培养基的三角瓶中，每瓶接种5～6个花粉粒；放入32～35℃培养箱中暗培养2～5d后，置于25℃、光照强度2000～2500lx、光照时间16h/d的培养室培养；转入生根培养基；待根部发育完全，开盖练苗，清洗根部培养基，移入营养钵。本发明设计了一种经胚状体途径诱导产生单倍体植株的方法，其步骤简单、实用，用时短，效率高，全程需要12周时间，大大提高了获得单倍体材料的进程。

技术领域

本发明涉及农业技术领域，尤其涉及一种基于胚状体途径的辣椒花药培养新方法及再生植株的倍性鉴定方法。

背景技术

辣椒(Capsicum annuum L)在我国广泛种植，是我国的第二大蔬菜栽培作物，在我国农业生产中占有重要地位。辣椒的营养价值很高，其果皮中含有丰富的蛋白质、维生素C、胡萝卜素以及钙、铁维等物质，其中维生素C的含量位居蔬菜之首，并且其食用烹任的方式多种多样，深受人们的喜爱。

辣椒属异花授粉作物，天然杂交率高，通过自交分离选育纯系一般需进行4～6代选择才能获得，不仅时间长，而且基因之间存在显隐性关系，因此很难选育出综合性状优良、具有突出优点且配合力强、适宜作为强优势亲本的品系。

单倍体育种作为一种新的育种途径，通过培育单倍体，然后对单倍体材料进行加倍，在较短时间内便可以选育出适宜作为强优势亲本的纯系，同时由于不存在基因间的显隐性作用，因此一些由隐性基因决定的性状便可以得到充分利用，这样既能大大缩短了育种年限，又能丰富所选优良品系的遗传基础，这样的品系易于实现亲本的选配。花药培养属于种质资源创制的重要辅助育种技术，不仅能缩短常规杂交育种所需的年限，提高选种效率，还能充分表现各种配子组合的基因型类型，在育种和机理研究中均具有很大潜力。应用花药培养技术可迅速得到纯合的双单倍体，大大加速育种进程；从开始培养到获得完全纯合DH系一般只需1～2年时间。

尽管花药培养在辣椒上开始较早，但其技术还不够成熟和完善。辣椒花药培养一般采用脱分化、再分化等愈伤组织诱导途径及生根壮苗等培养程序，步骤烦琐，诱导率低，再生成苗率低。经胚状体途径诱导产生单倍体植株的研究少有报道，并且从胚状体诱导产生单倍体植株的频率也并不乐观。因为许多胚状体不能正常的生长发育，或只产生根而不分化芽，成苗率低。

据此，目前迫切需要对影响辣椒花药培养胚状体诱导成苗因素进行系统性研究，旨在建立简单、高效的辣椒花药培养体系，为单倍体育种实践打下坚实的基础。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种基于胚状体途径的辣椒花药培养新方法及再生植株的倍性鉴定方法，该方法能够快速、稳定地获得大量单倍体植株。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

一种基于胚状体途径的辣椒花药培养新方法，包括如下步骤：

(1)选取杂交一代辣椒品种，在盛花期选取处于单核靠边期的花蕾，装入自封袋中置于4℃环境中24～48h；

(2)取出花蕾，经流水冲洗后，置于超净工作台中用75％酒精消毒30～35s，再用0.1％升汞杀菌10～15min，最后用灭菌的超纯水冲洗；

(3)在超净工作台上，将消毒后的花蕾置于无菌滤纸上，待吸干其表面水分后剥开花蕾，取出花药；

(4)将取出的花药接种于装有诱导培养基的三角瓶中，每瓶接种5～6个花粉粒，将三角瓶封口；

(5)接种后随即放入32～35℃的恒温培养箱中暗培养2～5d后，置于温度25℃、光照强度2000～2500lx、光照时间16h/d的培养室进行40～60d培养；