[发明专利]双级扩大DNA级联循环系统及其应用

权利要求书

1.一种双级扩大DNA级联循环系统，其特征在于，包括CHA-HCR电路和MnO₂纳米载体，MnO₂纳米载体用于负载递送CHA-HCR电路进入细胞，促进与生物膜的融合，在细胞内谷胱甘肽存在的情况下释放CHA-HCR探针，用于智能感知和癌症识别，

在miR-21的作用下触发CHA-HCR双扩增DNA级联电路，实现多重荧光基团发光，

所述CHA-HCR电路作为一对多的信号放大元件，由CHA放大电路和HCR放大电路两个功能模块组成，CHA放大电路包括发夹链H₁和H₂，HCR放大电路包括发夹链H₃和H₄，具体序列如下：

H₁ SEQ ID NO:1：5’-CA GAC TG A TGT TGA T AC CGA TTC GCA A TCA ACA TCA GTCTG A TAA GCT A-3’，

H₂ SEQ ID NO:2：5’-CGC TTC TAC ACT A CC GAT TCG CAA TCA CA GAC TGA TGT TGAT TGC GAA TCG GT AT CAA CAT-3’，

H₃ SEQ ID NO:3：5’-TTG CGA ATC GGT AGT GTA GAA GCG CTC CAT CGC TTC TAC ACTTCC GAT-3’，

H₄ SEQ ID NO:4：5’-CGCTTCTACACTTCCGATTCGCAATTTT TTT TTTTATC

GGAAGTGTAGAAGCGATGGAG-3’，

其中，发夹链H₃的3’端和5’分别标记有荧光基团和猝灭基团。

2.根据权利要求1所述的双级扩大DNA级联循环系统，其特征在于，还包括CAR逻辑门，CAR逻辑门负载在MnO₂纳米载体上，与CHA-HCR构成CAR-CHA-HCR，CAR逻辑门用于分析miR-21和miR-892b的含量，当miR-21高表达，miR-892b低表达时，释放miR-21，在miR-21的作用下触发CHA-HCR双扩增DNA级联电路，实现多重荧光基团发光，CAR逻辑门包括LOCK链、CL1链和CL2链，CL1链和CL2链分别与LOCK链部分碱基配对形成CAR逻辑门，具体序列如下：

LOCK SEQ ID NO:5：5’-TCA ACA TCA GTC TG A TAA GCT A T CTA CCC AGA AAG GAGCCA GTG-3’，

CL1 SEQ ID NO:6：5’-CA GAC TGA TGT TGA-3’，

CL2 SEQ ID NO:7：5’-T TCT GGG TAG A T AGC TTA T-3’。

3.根据权利要求1或2所述的双级扩大DNA级联循环系统，其特征在于，，HCR放大电路中增加发夹链H_3free，HCR放大电路包括发夹链H₃、H₄和发夹链H_3free，

H_3free SEQ ID NO:8：5’-TTG CGA ATC GGT AGT GTA GAA GCG CTC CAT CGC TTC TACACT TCC GAT-3’。

4.权利要求1所述的双级扩大DNA级联循环系统在非治疗目的的miR-21检测中的应用。