[发明专利]一种CAR-NK细胞及其制备方法

权利要求书

1.一种NK细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：将待扩增的NK细胞接种至已用抗CD16抗体和抗NKp46抗体包被液包被的细胞培养容器中培养，NK细胞的培养条件为35~37℃、4.5~5.5% CO₂、静置培养，所述抗CD16抗体包被液的浓度为1μg/ml~15μg/ml，所述抗NKp46抗体包被液的浓度为5μg/ml~15μg/ml，NK细胞的培养基中添加IL-2、IL-15、IL-18、IL-21、IFN-γ细胞因子，以细胞培养基的总体积为基准，所述IL-2的浓度为100-500 IU/ml，所述IL-15的浓度为50-150 IU/ml，所述IL-18的浓度为1-10 ng/ml，所述IL-21的浓度为0.5-5 ng/ml，所述IFN-γ的浓度为1-5 ng/ml。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述细胞培养容器选自TC处理的细胞培养容器。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述细胞培养基中还包括血清替代物，和/或，培养期间补加细胞培养基。

4.一种CAR-NK细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：将包含编码CAR的核酸构建体感染培养了5~8天的权利要求1-3任一所述的制备方法获得的NK细胞，感染后继续培养获得CAR-NK细胞，感染后培养所用的培养基为感染培养基，感染培养基中添加IL-2、IL-15、IL-18、IL-21、IFN-γ、P188，以细胞培养基的总体积为基准，所述IL-2的浓度为100-500 IU/ml，所述IL-15的浓度为50-150 IU/ml，所述IL-18的浓度为1-10 ng/ml，所述IL-21的浓度为0.5-5 ng/ml，所述IFN-γ的浓度为1-5 ng/ml。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，还包括如下特征中的一项或多项：

1）所述包含编码CAR的核酸构建体选自慢病毒、腺相关病毒或腺病毒中的任一种或多种；

2）感染时添加病毒感染增强剂。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，还包括如下特征中的一项或多项：

1）所述感染培养基中还包括血清替代物；

2）感染后培养7~10天；

3）培养期间补加感染培养基。