[发明专利]用于SFTSV等八种病原体联检的组合物及检测方法

说明书

本发明涉及微生物核酸的测定方法，特别地，本发明提供了一种用于联合检测八种病原体的引物和探针组合物和检测方法，这八种病原体包括莫氏立克次体、Q热立克次体、恙虫病东方体、埃立克体、斑点热群立克次体、无形体、荆门病毒和新布尼亚病毒，引物和探针组合物包括对应的8套引物和探针组合物，其核苷酸序列依次为序列表中SEQ ID NO:1‑35所示，本发明提供的检测方法经过杂交条件优化，在同一个反应体系中能够定性或定量检测八种病原体，整个检测过程简便、快速，最低能检测到10¹copy/μL病毒DNA，具有高通量、低成本、高特异和高灵敏的特点。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，尤其是一种联合检测这八种病原体的引物和探针组合物、液相芯片及其液相芯片非诊断性检测方法。

背景技术

近年来，我国蜱传疾病形势日益严峻，大多数是重要的自然疫源性疾病和人兽共患病，且蜱传疾病的病原体种类繁多，还可以同时携带多种病原体，包括病毒、细菌、立克次体及螺旋体等等。

立克次体是蜱传疾病主要病原体类型，立克次体是一类胞内寄生的原核细胞型微生物，在立克次体目(Rickettsiales)中包括立克次体(Rickettsiaceae)、无形体(Anaplasmataceae)和全孢菌(Holosporaceae)等科。对人类致病的立克次体主要有立克次体科中的立克次体属、东方体属、柯克斯体属、埃立克体属，以及无形体中的无形体属。立克次体病在全世界范围流行，我国流行的主要有地方性斑疹伤寒Q热、丛林斑疹伤寒(又名恙虫病)、埃立克次体病、斑点热、人粒细胞无形体病等，对应的病原体分别是莫氏立克次体(Rickettsiamooseri，MS)、Q热立克次体(简称Q热，QfeverRickettsia，QF)、恙虫病东方体(Orientiatsutsugamushi，Ot)、埃立克次体(Ehrlichia，Eri)、斑点热群立克次体(Spottedfevergroup Rickettsia，SpottedfevergroupRickettsia，SFGR)、嗜吞噬细胞无形体(简称无形体，Anaplasmaphagocytophilum，AP，曾称埃立克体Ehrlichia，Eh)等。

病毒也是蜱传疾病主要病原体的类型之一。近年来，随着蜱传疾病病毒谱的调查研究不断深入，新的潜在病毒谱也相继被发现并鉴定，如主要流行于中国中部的荆门病毒(Jingmentickvirus，JMTV)，该病毒在蜱叮咬人组织、牛、阳以及多种蜱中都有被检测到，但是目前针对荆门病毒的诊断及治疗还尚无可用检测试剂或产品；如2004年以来湖北、河南、江苏、浙江等地区高度散发出现的发热伴血小板减少综合征的主要病原体：发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(Severfeverwiththrombocytopnia syndromevirus，SFTSV)，又称新布尼亚病毒，2011年SFTSV在我国被首次分离鉴定，病毒感染人体后引起的发热伴血小板减少综合征、发热、血小板和白细胞减少等主要临床表现，病情危重者可发生多脏器功能衰竭而死亡。SFTSV病毒感染病例都有明确的蜱虫叮咬历史，其发病死亡率达到12％-30％；如主要流行于中国东北地区的森林脑炎病毒(Tick-borne encephalitisvirus，TBEV)(又称蜱传脑炎病毒)，可以导致了林区每年5-7月份常见的以侵袭中枢神经统为主的自然疫源性急性传染病，多因劳动者在森林地区的劳动活动中被蜱叮咬而感染中枢神经系统导致的急性病毒性传染病。