[发明专利]靶向清除抗原特异性T细胞的核壳结构纳米粒构建与应用

说明书

本发明提供靶向清除抗原特异性T细胞的核壳结构纳米粒构建与应用。所述的核壳结构纳米粒内核为载有他克莫司的聚合物纳米粒，外壳包被阳离子脂质膜用于负载抗原，具有程序性释药特性。该载药纳米粒被树突状细胞摄取后，外层抗原快速释放，供DCs加工并以抗原肽‑主要组织相容性复合物的形式呈递，后者与T细胞受体实别和偶联，从而靶向抗原特异性T细胞；内核FK506延后缓释，可通过细胞间相互作用传递至T细胞，实现特异性T细胞克隆清除。本发明所述的纳米粒外层的抗原可以是蛋白、多肽或编码抗原表位的核酸序列，FK506可由其它免疫抑制剂替代。该纳米载药系统可在T细胞免疫过激引起的相关疾病中发挥作用。

技术领域

本发明属于制药领域，涉及一种靶向清除抗原特异性T细胞的核壳结构纳米粒构建与应用。主要是构建用以缓解T细胞异常活化引起的机体损伤的载药核壳结构纳米粒，以及该纳米粒在I型糖尿病、多发性硬化症、类风湿性关节炎和炎症性血管炎等自身免疫性疾病和异基因器官移植中的医药应用。

背景技术

由于同源移植物的稀缺，同种异体器官移植已经逐渐成为临床应用的主要手段。然而，异基因移植物会被器官受体的免疫系统实别为侵入性的“非己”物质而遭受免疫攻击和排斥。过度活跃的细胞免疫是同种异体移植排斥反应的主要诱因之一，其中，效应T细胞剧烈扩增，产生大量异基因抗原特异性T细胞克隆以攻击移植物，导致炎症、组织损伤，甚至移植失败[Front Immunol 7,582(2016)]；而记忆T细胞可介导慢性移植排斥反应，这与患者的不良预后密切相关[Sci Adv 8,eabk0270(2022)]。

为了缓解T细胞介导的排斥反应(TCMR)并延长移植物存活时间，器官受体通常被要求终身服用免疫抑制剂。他克莫司(FK506)是第二代(非甾体)免疫抑制剂的代表，是FDA批准的钙调神经磷酸酶抑制剂(CNI)，临床用于心脏、肝脏、肾脏等实体器官移植的术后控制。FK506干扰钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子(NFAT)途径，从而抑制T细胞的活化和增殖，限制TCMR[Biochim Biophys Acta 1498,1-18(2000)]。然而，FK506的应用受到其治疗窗窄、副作用多的限制[Kidney Int 67,2440-2447(2005)]，这主要是FK506对广谱T细胞的非特异性免疫抑制作用引起的[Nat Biotechnol 37,238-251(2019)]。事实上，长期服用FK506的患者系统性免疫受损，导致机会性感染和恶性肿瘤的易感性增加[N Engl J Med351,2715-2729(2004)][Clin Transplant 22,372-377(2008)]。因此，将FK506递送至异基因移植物抗原特异性T细胞或许可以改善移植效果并减少脱靶毒性。

树突状细胞(DCs)在调节同种异基因免疫反应中发挥着重要作用[Nat RevImmunol 4,24-34(2004)]。成熟的DCs可引发异基因移植物特异性T细胞的充分活化，这是通过细胞表面：1)呈递异基因抗原肽-主要组织相容性复合物分子(pMHC)，与特异性T细胞受体(TCR)相互作用，作为介导T细胞活化的第一信号；2)表达B7配体，如CD80、CD86等共刺激分子，结合T细胞表面的受体CD28后引发T细胞活化的第二信号；3)分泌促进淋巴细胞活性的炎性细胞因子以诱导T细胞活化的第三信号。相反，耐受性DCs表面表达MHC分子，但共刺激信号弱于共抑制信号[Genome Biol 6,223(2005)]，且免疫刺激性细胞因子分泌不足[Nat Rev Immunol 7,610-621(2007)]。这类耐受性DCs单独使用或与其他免疫抑制剂和/或免疫调节剂联合使用可促进T细胞耗竭、调节性T细胞(Treg)扩增和II型CD4辅助T(Th2)细胞极化，已被证明能有效减轻同种异体移植排斥反应。然而，这种治疗方式的抗原特异性不足，还存在一定安全隐患[Diabetes Care 34,2026-2032(2011)][Int Immunopharmacol21,247-254(2014)。