[发明专利]靶向清除抗原特异性T细胞的核壳结构纳米粒构建与应用

权利要求书

1.一种靶向清除抗原特异性T细胞的核壳结构纳米粒构建方法，其特征在于，通过以下方案实现：

(1)载免疫抑制剂纳米粒内核的构建：

以聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒作为疏水性内核，包载免疫抑制剂他克莫司，其中，他克莫司与聚乳酸-羟基乙酸共聚物的药脂质量比为1:10-1:5000；

(2)载免疫抑制剂纳米粒内核外层包被阳离子脂质膜：

在步骤(1)载免疫抑制剂纳米粒内核表面包被参有阳离子脂质的脂质膜，其中，阳离子脂质占总脂质质量的10％-90％；

(3)共载抗原和免疫抑制剂的核壳结构纳米粒的制备：

一步法或多步法制备内核负载免疫抑制剂、表面由正电荷脂质膜包被的核壳结构纳米粒，随后在粒子表面负载抗原，得到共载抗原和免疫抑制剂的核壳结构纳米粒。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述聚乳酸-羟基乙酸共聚物选用聚乳酸、聚左旋乳酸、聚乙醇酸、聚原酸酯、聚甲基丙烯酸甲酯或乙烯-醋酸乙烯酯共聚物的聚合物材料，或选用无机材料介孔二氧化硅替代。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述他克莫司选用环孢素、雷帕霉素、糖皮质激素或霉酚酸酯，或选用其它免疫抑制剂替代。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(2)所述的脂质外膜选用阳离子脂质、辅助脂质、结构脂质和PEG化脂质，其中，阳离子脂质选用(2,3-二油酰基-丙基)三甲基氯化铵、1,2-二甲基-3-三甲基铵-丙烷、1,2-硬脂酰-3-三甲基铵-丙烷、二甲基双十八烷基铵或3β-[N-(N’,N’-二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇；辅助脂质选用磷脂酰胆碱或磷脂酰乙醇胺，其中磷脂酰胆碱选用二硬脂酰基磷脂酰胆碱，磷脂酰乙醇胺选用1,2-二乙酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；结构脂质选用胆固醇。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中载免疫抑制剂的核壳结构纳米粒的制备通过微流控技术一步完成，或通过纳米沉淀加脂质膜挤出包被两步完成。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中核壳结构纳米粒外层负载的抗原是抗原蛋白、抗原多肽、编码抗原表位的核酸序列或含抗原的免疫复合物。

7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中核壳结构纳米粒外层负载抗原通过正电性脂质膜与负电性抗原之间的静电相互作用和范德华力实现，或通过对抗原进行结构修饰来促进抗原与外层脂质膜之间的键合作用实现。

8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤(3)中共载抗原和免疫抑制剂的核壳结构纳米粒有外层抗原快速释放，内核免疫抑制剂延后缓释的程序性释药模式。

9.权利要求1所述方法制备的核壳结构纳米粒在制备缓解异基因器官移植和自身免疫性疾病药物中的应用，其特征在于，所述核壳结构纳米粒通过直接作用于抗原呈递细胞，尤其是树突状细胞，并通过APCs间接作用于T细胞，用以预防或治疗抗原特异性T细胞活化相关的疾病或病理情况。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述疾病是由T细胞异常活化引起的机体损伤所致，其中疾病相关的抗原表位已被实别和认可，临床诊断为I型糖尿病、多发性硬化症、类风湿性关节炎或炎症性血管炎。