[发明专利]一种检测高尔基体蛋白73的荧光生物传感器

说明书

一种基于荧光共振能量转移构建用于GP73检测的荧光生物传感器，以GP73适配体为识别探针，GP73适配体能够特异性识别和结合GP73蛋白，基于氮、硫掺杂石墨烯量子点N,S‑GQDs‑GP73适配体和二硫化钼@还原性氧化石墨烯MoS₂@RGO间的荧光共振能量转移原理，建立一种检测GP73的荧光生物传感器，用以检测人体血清中GP73的含量。该方法依据一步式反应原理精简了整个检测过程，检测周期时间短，成本低，可实验性强。

技术领域

本发明属于光学传感技术领域，具体涉及一种基于荧光共振能量转移的GP73检测的荧光生物传感器。

背景技术

高尔基体蛋白73(GP73)又称高尔基膜蛋白Ⅰ或高尔基磷酸化蛋白2，是近年来发现的一种表达于上皮细胞高尔基体的跨膜蛋白。发明专利CN 114113604A公开一种基于流式荧光技术的来检测标志物GP73的方法，以磁性荧光编码微球作为载体，将荧光标记物与目标物抗体偶联从而形成荧光免疫复合体，通过检测复合体的荧光强度计算目标物浓度，但此方法所使用的磁性荧光编码微球制备繁琐，操作不便。发明专利CN 111273033A公开了一种高尔基体蛋白73的测定试剂盒，其将磁微粒技术与吖啶酯标记技术相结合实现对目标物的化学发光测定，该技术中将GP73抗体与目标物进行偶联时需要较低的温度环境以及较长孵育的时间。荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)是指当一个荧光分子的发射波长与另一个荧光物质的激发波长相重叠时，两者之间产生能量的转移现象，在荧光检测这方面，很有必要依托FRET现象构建高检测精度的新型荧光生物传感器。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于氮,硫掺杂石墨烯量子点(N,S-GQDs)和二硫化钼@还原性氧化石墨烯(MoS₂@RGO)的荧光共振能量转移(FRET)的用于GP73检测的荧光生物传感器。

为了解决该技术问题，采用N,S-GQDs作为荧光物质，将N,S-GQDs与氨基化GP73适配体(GP73_Apt)通过酰胺键进行结合，形成荧光标记的N,S-GQDs-GP73_Apt复合物。在N,S-GQDs-GP73_Apt复合物中加入MoS₂@RGO，N,S-GQDs-GP73_Apt复合物与MoS₂@RGO通过范德华力和π-π共轭结合在一起，发生荧光共振能量转移FRET，整个系统的荧光强度就会变低，形成N,S-GQDs-GP73_Apt/MoS₂@RGO FRET荧光生物传感器；加入GP73蛋白后，由于GP73_Apt对GP73的特异性，GP73优先与N,S-GQDs-GP73_Apt结合形成N,S-GQDs-GP73_Apt-GP73复合物，从MoS₂@RGO底面分离，中断了荧光共振能量转移，从而使N,S-GQDs-GP73_Apt的荧光得到恢复。根据体系中荧光强度恢复程度的变化，建立GP73浓度和N,S-GQDs-GP73_Apt的荧光强度变化的线性关系，实现了GP73的快速灵敏、选择性好的定量检测。

本发明按照以下步骤进行：

步骤1：荧光共振供体N,S-GQDs-GP73_Apt的制备

(1)N,S-GQDs的制备：称取柠檬酸和硫脲，加入纯水定容后搅拌均匀，高温加热一定时间，冷却后加入乙醇混合搅拌，待搅拌完全后，透析一段时间，将透析后的溶液，冷冻干燥得到N,S-GQDs固体；

(2)N,S-GQDs-GP73_Apt的制备：量取N,S-GQDs和GP73适配体GP73_Apt，使用EDAC/NHS交联剂进行活化交联，在室温且避光的条件下，搅拌孵育一定时间，得到N,S-GQDs-GP73_Apt溶液。