[发明专利]一种检测高尔基体蛋白73的荧光生物传感器

权利要求书

1.一种基于荧光共振能量转移构建用于GP73检测的荧光生物传感器，按以下步骤进行：

步骤1：荧光共振供体氮,硫掺杂石墨烯量子点-GP73适配体N,S-GQDs-GP73_Apt的制备

(1)氮、硫掺杂石墨烯量子点N,S-GQDs的制备：称取柠檬酸和硫脲，加入纯水定容后搅拌均匀，加热，冷却；加入乙醇搅拌，用透析袋透析；将透析后的溶液冷冻干燥，得到N,S-GQDs固体；

(2)N,S-GQDs-GP73_Apt的制备：量取N,S-GQDs和GP73适配体GP73_Apt，使用交联剂进行活化交联，孵育，得到N,S-GQDs-GP73_Apt溶液；

步骤2：基于荧光共振能量转移的荧光生物传感器的构建

(1)称量MoS₂粉末，加入N,N-二甲基甲酰胺DMF溶液定容，将MoS₂粉末分散在DMF中，即得MoS₂分散液；

(2)称量氧化石墨烯GO粉末，加入纯水定容，将GO粉末分散在纯水中，即得GO分散液；向GO分散液中加入抗坏血酸AA，搅拌混合，得到还原氧化石墨烯RGO分散液；

(3)将MoS₂分散液和RGO分散液进行混合，搅拌一定时间后，得到二硫化钼@还原性氧化石墨烯MoS₂@RGO溶液，将所得溶液离心，将分离出的固体洗涤并干燥得MoS₂@RGO；称量MoS₂@RGO固体，加入纯水搅拌混合后得到MoS₂@RGO分散液；

(4)将MoS₂@RGO溶液和N,S-GQDs-GP73_Apt溶液进行混合，混匀后静置孵育一段时间，使N,S-GQDs的荧光淬灭，形成N,S-GQDs-GP73_Apt/MoS₂@RGO FRET荧光生物传感器；用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为368nm，测量其450nm处荧光强度，记作F₀；

步骤3：GP73工作曲线的绘制

(1)将不同浓度的GP73溶液加入到N,S-GQDs-GP73_Apt/MoS₂@RGO FRET荧光生物传感器，孵育，检测450nm处的峰值变化；用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为368nm，测量其450nm处荧光强度，记作F₁；

(3)用(F₁-F₀)/F₀作为纵坐标，GP73浓度作为横坐标，绘制工作曲线，计算出该荧光生物传感器的最低检测限；

步骤4：实际样品中GP73的检测

(1)将实际样品加入到步骤2中的N,S-GQDs-GP73_Apt/MoS₂@RGO FRET的荧光生物传感器，孵育，采用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为368nm，记录450nm处的荧光强度；

(2)根据步骤3所得到的GP73的工作曲线，计算待测样品中GP73的浓度。

2.按照权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于：步骤1中透析袋分子量为300，透析时间为6h。

3.按照权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于：步骤1中N,S-GQDs的浓度为1.0mg/mL；GP73_Apt浓度为1.0μM；交联剂溶液含有碳二亚胺EDAC与N-羟基琥珀酰亚胺NHS，其中EDAC浓度为0.7668mg/mL，NHS浓度为2.1713mg/mL。

4.按照权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于：步骤1中N,S-GQDs溶液、GP73_Apt溶液和交联剂溶液的体积比为10：10：1，孵育时间为1h。

5.按照权利要求1所述的荧光生物传感器，其特征在于：步骤2中所述MoS₂浓度为1.0mg/mL；GO浓度为1.0mg/mL；加入的AA与GO质量比为10：1；搅拌时间为12h。