[发明专利]一种基于MoS2

说明书

一种基于MoS₂‑Au‑Fc纳米复合材料构建低密度脂蛋白检测的传感器，以LDL适配体为识别探针，基于二硫化钼‑金‑二茂铁甲酸MoS₂‑Au‑Fc的纳米复合材料良好的电子传递效应和优异的负载能力，LDL适配体能够特异性识别和结合LDL蛋白，构建一种能对LDL蛋白进行特异性识别以及定量分析的新型适配体传感器，用以检测血清中LDL的含量。该方法操作简单、省时、费用低，最低检测限为0.001μg/mL。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种基于纳米复合材料构建低密度脂蛋白检测的传感器。

背景技术

低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)检测方法主要有化学沉淀法、Friedewald间接计算法、超速离心法、电泳法、免疫分离法、电化学免疫传感器等。化学沉淀法麻烦、费时，需用到多种表面活性剂，且不能去除干扰蛋白的影响；Friedewald间接计算法不能适用于血脂异常病人的血清样品；超速离心法需要大型昂贵仪器来将LDL进行分离；电泳法通过分离LDL并对其进行脂质染色，测定其发色强度，操作复杂，难以处理多数待测体。公开号CN 104914141 B的发明专利，涉及一种在氧化铟锡玻璃上修饰金-抗体LDL以及其它修饰物，以电化学工作站为信号输出设备对LDL进行检测的方法。公开号CN 105784801B的发明专利，涉及一种双酶协同催化银沉积检测LDL的方法，该法通过对丝网印刷电极修饰纳米金以及抗体LDL来捕获LDL，并在酶作用下催化生成过氧化氢，进而催化银离子沉积，通过检测银的溶出伏安电流来实现对LDL浓度进行检测。上述两种方法实现了对LDL的特异性识别以及快速检测，然而，所用到的抗体LDL价格昂贵且存储条件苛刻，因此，需要建立一种快速、灵敏、操作简单、便宜的LDL检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于二硫化钼-金-二茂铁甲酸(MoS₂-Au-Fc)的纳米复合材料和LDL适配体(LDL_Apt)来构建适配体传感器检测LDL的方法，提高LDL的检测效率，提高灵敏度。

本发明的检测原理为：采用静电吸附作用将MoS₂-Au-Fc纳米复合材料修饰在丝网印刷电极表面。通过非共价结合作用以及分子间作用力将LDL适配体负载在MoS₂-Au-Fc纳米复合材料表面，适配体因其较为不稳定的空间结构而以单链形式与复合材料连接，进而能够被修饰到电极上形成生物传感界面。在生物传感界面上加入LDL后，LDL适配体会特异性结合LDL，形成蛋白-适配体复合物而呈稳定的空间结构，有序排列在电极表面，从而构建了检测LDL的适配体传感器。二茂铁甲酸(Fc)作为电活性物质，其可吸附在电极表面产生电化学信号。二硫化钼(MoS₂)和金纳米颗粒(Au NPs)可为适配体传感器提供大的比表面积和高电导率，扩大了检测信号，从而提高传感器灵敏度。

本发明按照以下步骤进行：

步骤1：MoS₂-Au-Fc纳米复合材料的制备

(1)二硫化钼(MoS₂)的预处理：往MoS₂加入N，N-二甲基甲酰胺(DMF)，随后用超声波破碎仪进行破碎，使其由块状物破碎成片状物，随后加入β-巯基乙胺并在恒温磁力搅拌器下搅拌，离心，去上清液，得到氨基化的二硫化钼(MoS₂-NH₂)。

(2)二硫化钼-二茂铁甲酸(MoS₂-Fc)的制备：取等比例的Fc粉末和MoS₂-NH₂混合，并加入N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC/NHS)，随后搅拌，离心，去上清液，得到MoS₂-Fc。