[发明专利]一种植物乳杆菌冻干保护剂及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种植物乳杆菌冻干保护剂及其制备方法和应用，包括方法如下步骤：将银耳多糖溶液与酪蛋白溶液混合，进行湿热接枝反应，即得。本发明利用银耳多糖和蛋白质发生水热反应生成具有两亲性的糖基化产物，该产物能降低益生菌菌体的损伤，显著提高了长期处于低温冷冻干燥条件下的植物乳杆菌的冻干存活率，解决了现有植物乳杆菌菌粉在冷冻干燥制备、贮藏过程中容易失活的问题，且克服了现有技术中冻干保护剂无法为植物乳杆菌恢复活力与增殖提供营养物质的难点。

技术领域

本发明属于益生菌制剂技术领域，具体指一种富含银耳多糖的植物乳杆菌冻干保护剂的制备。

背景技术

植物乳杆菌因其具有调节肠道菌群、缓解乳糖不耐症、增强机体免疫力、降低胆固醇等益生作用，在食品、医疗等方面的应用日益广泛，市场需求巨大。植物乳杆菌冻干粉主要通过真空冷冻干燥技术来生产，冷冻干燥过程一般会造成益生菌的细胞膜通透性改变、蛋白质变性失活、pH值被破坏、DNA损伤和膜脂肪酸组成发生改变等，菌液直接冷冻干燥存活率极低。因此，在益生菌制剂的生产过程中，为了保护益生菌的活性，除了控制冻干工艺制程外，最关键的是的挑选益生菌合适的冻干保护剂提高菌体存活率，此外，菌粉的后期储藏稳定性也与冻干保护剂有着密切的关系，因此开发一种合适的植物乳杆菌冻干保护剂尤为重要。

银耳多糖(Tremella polysaccharides，TPS)是一种真菌黏性多糖，目前已有报道证实具有益生活性。因其特殊的结构，有较高良好的成膜性和阻氧性等特性。植物乳杆菌为厌氧或兼性厌氧菌，银耳多糖良好的成膜性可密切包裹菌株，其阻氧特性更有利于隔绝氧气。且由于银耳分子结构中含有葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸，属于酸性多糖，可以与蛋白质发生复合反应，作为冷冻保护剂运用于冻干菌粉中。两种大分子物质之间通过静电作用和其他弱相互作用如疏水相互作用、范德华力、氢键作用等非共价结合。但由于银耳多糖的分子质量较大，低浓度下就表现出很高的粘度，不易与菌液混合均匀，影响其在冻干过程对菌种的保护作用。因此，对银耳多糖的结构进行适度的改性，并利用其与蛋白质的相互作用，构建一种具有促益生活性的菌种保护剂。在冷冻干燥过程中，减缓益生菌菌体内部结构破坏带来的损伤，保证菌株存活率，提高冻干菌粉应用价值。

发明内容

本发明的目的在于解决现有冷冻干燥生产植物乳杆菌菌粉在生产制备、贮藏中容易失活的问题，且克服现有技术中益生菌冻干保护剂无法为植物乳杆菌恢复活力与增殖提供营养物质的难点，本发明提供了一种植物乳杆菌冻干保护剂及其应用，所使用的保护剂含有能够促进植物乳杆菌增殖的银耳多糖，同时利用改性后的银耳多糖与酪蛋白相互作用生成的糖基化产物，有效提高植物乳杆菌冻干后的存活率。

本发明的目的是提供了一种冻干保护剂，本发明采取的技术方案为：

一种植物乳杆菌冻干保护剂的制备方法，包括以下步骤：将银耳多糖溶液与酪蛋白溶液混合，进行湿热接枝反应，即得。

进一步地，所述银耳多糖溶液的制备方法为：取银耳多糖加水配置成溶液，超声处理，即得。

进一步地，所述超声功率为240～480W，超声温度为30℃，超声时间为2～10min。

进一步地，所述酪蛋白溶液的制备方法为：将酪蛋白溶解在pH7.0的PBS缓冲液中，搅拌使其充分溶解，即可。

进一步地，所述银耳多糖溶液与所述酪蛋白溶液的质量浓度为4％，所述银耳多糖溶液与酪蛋白溶液的混合比例为3:1～7:1。

进一步地，所述湿热接枝反应的条件为：反应温度为120℃，反应pH为7.0，反应时间为10～30min。

本发明所述的植物乳杆菌冻干保护剂在植物乳杆菌冻干粉制备中的应用，包括如下步骤：

(1)将植物乳杆菌活化，接种和扩大培养，得植物乳杆菌培养液，所述植物乳杆菌培养液离心，得到菌泥；所述菌泥洗涤后重悬于无菌蒸馏水中得到菌悬液备用；