[发明专利]一种雨生红球藻破壁粉及其制备方法

权利要求书

1.一种雨生红球藻破壁粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)雨生红球藻细胞培养：取保存的雨生红球藻藻种活化，湿藻接种于3N-BBM培养基中持续培养，收集雨生红球藻，将雨生红球藻转入不含氮的BBM培养基中培养，获得成熟的红色厚壁孢子，离心收集细胞，得到湿藻生物质；

(2)按质量份计，取步骤(1)制得的湿藻生物质，采用珠磨法进行一次破壁，接着，向其中加入无水乙醇搅拌均匀，然后，采用滤膜过滤，得到一次滤渣和一次滤液；

(3)将步骤(2)制备得到的一次滤渣、斑马螺酶加入水混合均匀，调节pH，然后加热反应，采用滤膜过滤，得到二次滤渣和二次滤液；

(4)按质量份计，取步骤(3)中的二次滤渣、酸和水混合，经纳米粒子负载膜过滤，辅以紫外光照射，1-2kPa压力下过滤40-80min，过滤结束，将滤渣和滤液混合，得到细胞壁薄化的雨生红球藻；

(5)采用超声波对步骤(4)制得的细胞壁薄化的雨生红球藻进行第三次破壁，得到三次破壁雨生红球藻，将一次滤液、二次滤液和三次破壁雨生红球藻混合，经干燥后得到所述雨生红球藻破壁粉。

2.如权利要求1所述雨生红球藻破壁粉的制备方法，其特征在于，所述斑马螺酶的制备方法，包括以下步骤：将斑马螺清洗干净，清洗后在-20-(-15)℃冷冻20-24h，破壳，取出消化道、消化腺；将消化道、消化腺加入水中匀浆均匀，得到匀浆液，其中消化道、消化腺与水的浴比为1g:(6-10)mL；将匀浆液在0-4℃抽提12-24h，取抽提液用1-2mol/L盐酸调节pH至5-7，离心取上清液Ⅰ，调节上清液ⅠpH至7，然后加入-30-(-20)℃冷丙酮至冷丙酮的浓度为10-15wt％，离心取上清液Ⅱ，在上清液Ⅱ中再次加入-30-(-20)℃冷丙酮至冷丙酮的浓度为35-40wt％，离心取沉淀、冷冻干燥，得到消化道、消化腺粉末；将消化道、消化腺粉末加入pH＝6.5-7的水中静置10-30min，其中消化道、消化腺粉末与水的浴比为1g:(6-10)mL，离心取上清液Ⅲ、冷冻干燥，得到斑马螺酶；以上操作均在0℃进行。

3.如权利要求1所述雨生红球藻破壁粉的制备方法，其特征在于，步骤(4)中紫外光照射强度为50-150μmol/m²/s；

4.如权利要求1所述雨生红球藻破壁粉的制备方法，其特征在于，步骤(3)中一次滤渣、斑马螺酶、水的质量比为1：(0.002-0.005)：(8-15)。

5.如权利要求1所述雨生红球藻破壁粉的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述湿藻生物质的含水量为70-80％。

6.如权利要求1所述雨生红球藻破壁粉的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述珠磨法采用直径为0.1-1mm的氧化锆珠。

7.如权利要求1所述雨生红球藻破壁粉的制备方法，其特征在于，所述酸为马来酸、柠檬酸、硫酸、盐酸中的一种。

8.如权利要求1所述雨生红球藻破壁粉的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述纳米粒子负载膜的制备方法，包括以下步骤：

S1按质量份计，取5-10份磷钨酸、1-2份硝酸银、1-5份纳米活性炭和40-60份水混合，以100-200r/min转速搅拌并超声处理1-2h，超声波功率180-220W、频率30-50kHz，然后向其中加入10-20份硅溶胶，继续以100-200r/min转速搅拌并超声处理30-60min，得到磷钨酸银-纳米活性炭溶胶；

S2将孔径为15-20μm的尼龙滤膜按浴比1g：(15-30)mL浸入步骤S1所配制的磷钨酸银-纳米活性炭溶胶中10-20s后，以1-2mm/s的速度提出液面，在尼龙滤膜上形成一层磷钨酸银-纳米活性炭溶胶，在25-35℃下，以15-20m/s的风速将其吹干，经三次水洗、三次无水乙醇洗涤，干燥后，得到所述纳米粒子负载膜。