[发明专利]一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基及其应用

说明书

本发明涉及细胞培养领域，公开了一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基及其应用，该培养基包括基础培养基和添加剂，添加剂包括厚壳贻贝血清，原花青素，牛胰岛素，生长因子，抗生素，防御素，贻贝粘蛋白和缓冲剂；该培养基可用于厚壳贻贝外套膜细胞的体外培养，并能够更好的维持体外培养厚壳贻贝外套膜细胞的存活和生长；该培养基中加入了特定比例的防御素，使用该比例的培养基对厚壳贻贝外套膜细胞进行培养时才能够达到最佳的生长繁殖状态；本申请还提供了一种该培养基的应用方法，该方法操作简单，且培养的厚壳贻贝外套膜细胞细胞密度大，形态好，贴壁性高。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其是涉及一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基及其应用。

背景技术

厚壳贻贝主要分布在我国黄海、渤海和东海沿岸，以浙江沿海资源量最大，厚壳贻贝具有肉质鲜美、营养丰富、蛋白质含量高、生长繁殖快、抗病能力强、易于人工养殖、可快速检测环境水质的优点，是浙江舟山地区具有重要经济价值的养殖贝类，目前常使用贝类的外套膜细胞作为RNA干扰、细胞攻毒等细胞层面的实验，常见的有三角帆蚌、合浦珠母等贝类等，如公开号CN107043741A公开的一种珍珠蚌外套膜上皮细胞系的制备及该细胞系和细胞的应用，该细胞系制备方法为将珍珠蚌即河蚌或海蚌外套膜上皮细胞经体外培养15个月，传代至50代而成；所述珍珠蚌外套膜上皮细胞系保持了珍珠蚌外套膜上皮细胞的形态持点、生长和增殖特性，该培养方法使用最常用的培养基，且在简单的条件下进行原代细胞筛选培养，保证最终获得的细胞无需特殊试剂和条件就能增殖，为其今后的应用提供更好的空间。

再如公开号CN113462634A公开的一种大珠母贝外套膜细胞体外培养液、制备方法及使用方法，基础细胞培养基、板蓝根提取液、金银花提取液、胎牛血清、珍珠贝体液、卡那霉素、平衡盐溶液、葡萄糖。本发明通过在基础细胞培养基中添加中草药板蓝根和金银花、珍珠贝体液及其他组分，通过对各组分最优配比来实现外套膜细胞培养对体外培养。其中添加的板蓝根提取液和金银花提取液在整个培养过程中对外部环境中的有害细菌起到抑制效果，同时延长了细胞的生长寿命。

目前利用厚壳贻贝的外套膜细胞进行相关细胞层面的技术较少，而厚壳贻贝资源丰富，且生长繁殖极快，将其应用到细胞培养技术具有极高的价值和经济优势，同时现有技术中还未公开厚壳贻贝外套膜细胞培养基的相关内容。

发明内容

针对现有技术中还未公开厚壳贻贝外套膜细胞培养基的相关内容，本申请提供了一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基及其应用，该申请提供的厚壳贻贝外套膜细胞培养基包括基础培养基、组分a以及组分b，该培养基可用于厚壳贻贝外套膜细胞的体外培养，并能够更好的维持体外培养厚壳贻贝外套膜细胞的存活和生长。

本发明的具体技术方案为：

一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括a组分和b组分，

所述a组分包括厚壳贻贝血清，原花青素，牛胰岛素，生长因子，抗生素，防御素，贻贝粘蛋白和缓冲剂，所述b组分包括原花青素，牛胰岛素，贻贝粘蛋白和生长因子；

所述防御素包括质量比为1：2的厚壳贻贝防御素ALD-1和厚壳贻贝防御素ALD-2。