[发明专利]一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基及其应用

权利要求书

1.一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基，其特征是，包括基础培养基和添加剂，所述添加剂包括厚壳贻贝血清，原花青素，牛胰岛素，生长因子，抗生素，防御素，贻贝粘蛋白和缓冲剂。

2.如权利要求1所述的一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基，其特征是，所述添加剂中的各组分的终浓度为：厚壳贻贝血清15％，原花青素20000 μg/mL，牛胰岛素12 μg/mL，生长因子0.008 μg/mL，防御素0.06 μg/mL，贻贝粘蛋白0.08 μg/mL。

3.如权利要求1所述的一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基，其特征是，所述抗生素包括以下成分：60 μg/ml的青霉素，100 μg/ml的链霉素，40 μg/mL的庆大霉素，0.1 μg/ml的两性霉素B。

4.如权利要求1所述的一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基，其特征是，所述防御素包括质量比为1：2的厚壳贻贝防御素ALD-1和厚壳贻贝防御素ALD-2。

5.如权利要求1所述的一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基，其特征是，所述基础培养基为L-15培养基，所述缓冲剂为HEPES缓冲剂，所述厚壳贻贝外套膜细胞培养基的pH为7.2~7.3。

6.如权利要求1或2所述的一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基，其特征是，所述厚壳贻贝血清的制备方法包括：将厚壳贻贝血液离心取上清过滤除菌制得，离心条件为：离心温度4℃，离心转速12000rpm，离心时间10min。

7.一种如权利要求1至5所述的厚壳贻贝外套膜细胞培养基在培养厚壳贻贝外套膜细胞中的应用，其特征是，包括以下步骤：

（1）将厚壳贻贝外套膜组织剪切制成组织糊；

（2）将步骤（1）中的组织糊酶解制成厚壳贻贝外套膜细胞悬液；

（3）将b组分和a组分加入L-15培养基中混混合均匀制成厚壳贻贝外套膜细胞培养基；

（4）使用步骤（3）中制得的外套膜细胞培养基将步骤（2）中制得的厚壳贻贝外套膜细胞悬液稀释，并装配培养。

8.如权利要求7所述的一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基的应用，其特征是，步骤（2）中所述酶解使用的酶为胰蛋白酶。

9.如权利要求7所述的一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基的应用，其特征是，步骤（4）中所述稀释倍数为1.5×10⁴个/ml。

10.如权利要求7所述的一种厚壳贻贝外套膜细胞培养基的应用，其特征是，步骤（4）中所述装瓶培养的条件为：CO₂含量为5％，温度为37℃，静置培养。