[发明专利]一种人五毛滴虫LFD-RPA的可视化核酸检测试剂盒

权利要求书

1.一种与人五毛滴虫SPO11-1基因有关的引物与探针在检测人五毛滴虫感染中的应用，其特征在于：

1）提取人五毛滴虫基因组DNA，利用下述引物扩增人五毛滴虫SPO11-1基因，下游引物5'端由生物素Biotin化修饰；

上游引物：5'-ATAGTGGTGGACGAGCCCTGGATTGCCTTG-3'；

下游引物：5'-Biotin-CTTGTGCCAATCTCATAAAAACGCTCTCCT-3；

2）探针序列中5'端由羧基荧光素FAM修饰，相关G碱基被[THF]残基取代，3'端由C3-Spacer修饰；

探针：5'-[6-FAM]-GACGTGTAGTTCCAATACCAGCTTCACCAGATGG[THF]CA TAAAAGCAGTTAGATGTACA-[C3 Spacer]-3'。

2.一种人五毛滴虫LFD-RPA的可视化核酸检测试剂盒，其特征在于：

1）试剂盒中包括含RPA冻干颗粒的反应管、反应缓冲液A Buffer、扩增试剂B Buffer、权利要求1所述的引物和探针以及ddH₂O和侧流层析试纸条；其中：

所述RPA冻干颗粒反应管的组分包括：重组酶、DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白、dNTP以及外切酶；

权利要求1所述的上游引物、下游引物和探针在RPA试剂盒中的终浓度为2μM；

试剂盒中还应包含：阳性对照的DNA 模板为感染人五毛滴虫粪便基因组DNA；阴性对照的为未感染人五毛滴虫粪便基因组DNA，用于比较RPA产物以及监测RPA操作过程是否有污染；

所述试剂盒25μL反应体系如下：12.25μL的A Buffer，2μM上下游引物各0.6μL，2μM探针0.25μL，ddH₂O7.55μL，待检人五毛滴虫DNA模板2.5μL及1.25μL的B Buffer。