[发明专利]猴痘抗原、HIV1/2抗体和P24抗原的联检试纸条及其制备方法

权利要求书

1.猴痘抗原、HIV1/2抗体和P24抗原的联检试纸条，其特征在于，所述试纸条包括带有粘胶的PVC底板、沿底板宽度方向从下往上依次设置的样品垫、金标垫2、金标垫1、层析膜和吸水垫，且相邻组分互相衔接；

所述金标垫1上固化有胶体金标记的生物素化HIV1/2抗原和胶体金标记的生物素化P24抗体，所述金标垫2上固化有胶体金标记的生物素化猴痘抗体和链霉亲和素标记胶体金；

所述层析膜包括从靠近所述样品垫端至靠近所述吸水垫端依次平行设置、且相互间隔的检测线和质控线，所述检测线至少有三条，依次分别为包被能与猴痘抗原特异性结合的鼠抗猴痘单克隆抗体T1检测线、包被能与HIV P24抗原特异性结合的鼠抗HIV P24单克隆抗体T2检测线、包被能与HIV 1/2抗体特异性结合的HIV 1/2抗原T3检测线。

2.根据权利要求1所述的猴痘抗原、HIV1/2抗体和P24抗原的联检试纸条，其特征在于，所述层析膜为硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的通过时间为130-150s。

3.根据权利要求1所述的猴痘抗原、HIV1/2抗体和P24抗原的联检试纸条，其特征在于，样品垫通过样品垫处理液处理后制备得到，其中样品垫处理液的制备方法如下：配制10～100mM的Tris-HCl作为基础液，再添加0.1～1％m/v酪蛋白、0.1～0.3％m/v脱脂奶粉溶解8～24小时，再添加0.1～0.8％v/v Tween 20、0.1～0.8％m/v表面活性剂S9、0.5～5％m/vPVP-10、0.05～0.15％v/v的PC300、0.1～0.4％m/v EDTA-2Na、0.05～3mg/mL主动型异嗜性抗体阻断剂、0.1～0.4mg/mL抗RBC单克隆抗体，调节pH为7.0～9.0。

4.根据权利要求1所述的猴痘抗原、HIV1/2抗体和P24抗原的联检试纸条，其特征在于，所述样品垫选自玻璃纤维素膜、无纺布、聚酯纤维素膜、全血滤血膜中的一种。

所述样品垫为玻璃纤维素膜。

5.根据权利要求1所述的猴痘抗原、HIV1/2抗体和P24抗原的联检试纸条，其特征在于，胶体金标记抗原/抗体的方法包括以下步骤：

先将抗原或抗体进行生物素标记得到生物素化抗原或抗体，之后将其加入到已调节至预设pH范围内的胶体金溶液中，搅拌后加入聚乙二醇，再次搅拌并收集沉淀，将沉淀用胶体金复溶液复溶并混匀，即得；

其中胶体金标记生物素化猴痘抗体时，胶体金的预设pH为8.0～8.4，胶体金标记生物素化P24抗体时，胶体金的预设pH为8.8～9.2，胶体金标记生物素化HIV1/2抗原时，胶体金的预设pH为8.3～8.7；和/或

胶体金标记的方法抗原/抗体时胶体金的粒径为20nm。

6.根据权利要求1所述的猴痘抗原、HIV1/2抗体和P24抗原的联检试纸条，其特征在于，链霉亲和素标记胶体金的方法包括以下步骤：

将胶体金溶液调节pH为8.8～9.2，加入链霉亲和素，搅拌后加入聚乙二醇，再次搅拌并收集沉淀，将沉淀用胶体金复溶液复溶并混匀，即得；和/或

所述链霉亲和素标记胶体金中胶体金的粒径为40nm。

7.根据权利要求1所述猴痘抗原、HIV抗体和P24抗原的联检试纸条，其特征在于，金标垫1的制备方法包括如下步骤：

将金标垫经金标垫处理液处理后得到结合垫，将胶体金标记的生物素化HIV1/2抗原和胶体金标记的生物素化P24抗体以OD 1.1～1.3、OD 0.8～1.2的浓度，喷金体积为2～4μL/cm的参数混喷在结合垫上，烘制后即得。

8.根据权利要求1所述的猴痘抗原、HIV抗体和P24抗原的联检试纸条，其特征在于，金标垫2的制备方法包括如下步骤：

将金标垫经金标垫处理液处理后得到结合垫，将胶体金标记的生物素化猴痘抗体和链霉亲和素标记胶体金以OD 0.8～1.2、OD 0.6～0.8的浓度，喷金体积为2～4μL/cm的参数混喷在结合垫上，烘制后即得。